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Behavior

क्रोनिक हाइपोक्सिया-प्रेरित संज्ञानात्मक रोग के माउस मॉडल में एक्यूपंक्चर उपचार

Published: December 8, 2023 doi: 10.3791/65784
Automatic Translation
*1, *2,3, 4, 5,6, 3,5, 4,7, 2,3, 8, 5,6
1Heilongjiang University of Chinese Medicine, 2Hebei Provincial Key Laboratory of Luobing, 3Key Laboratory of State Administration of TCM (Cardio-Cerebral Vessel Collateral Disease), 4Hebei University of Chinese Medicine, 5Shijiazhuang Compound Traditional Chinese Medicine Technology Innovation Center, 6National Key Laboratory of Luobing Research and Innovative Chinese Medicine, 7Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd, 8The Second Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine
* These authors contributed equally

Summary

यहां, हम एक पुरानी हाइपोक्सिया माउस मॉडल पर हल्के संज्ञाहरण और एक्यूपंक्चर उपचार को लागू करने और संज्ञानात्मक परिवर्तन के बाद उपचार का आकलन करने के लिए व्यवहार परीक्षण आयोजित करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं।

Abstract

केंद्रीय तंत्रिका विकारों के उपचार ने लगातार चिकित्सा क्षेत्र के लिए महत्वपूर्ण चुनौतियां पेश की हैं। एक्यूपंक्चर, पारंपरिक चीनी चिकित्सा में निहित एक गैर-औषधीय अभ्यास, शरीर पर सटीक बिंदुओं में ठीक सुइयों के सम्मिलन पर जोर देता है और आमतौर पर विविध स्थितियों के प्रबंधन के लिए नियोजित किया जाता है। हाल ही में, एक्यूपंक्चर चिंता और श्वसन संबंधी विकारों सहित न्यूरोलॉजिकल रोगों की एक श्रृंखला के लिए एक आशाजनक चिकित्सीय हस्तक्षेप के रूप में उभरा है। हालांकि, क्रोनिक हाइपोक्सिया द्वारा प्रेरित संज्ञानात्मक शिथिलता के इलाज में एक्यूपंक्चर की क्षमता का अभी तक पता नहीं लगाया गया है। यह पत्र क्रोनिक हाइपोक्सिया-प्रेरित संज्ञानात्मक हानि के माउस मॉडल की स्थापना के लिए एक व्यापक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है, हल्के संज्ञाहरण का प्रशासन करता है, एक्यूपंक्चर उपचार करता है, और खुले क्षेत्र परीक्षणों और पानी के भूलभुलैया का उपयोग करके व्यवहार परिवर्तन और स्मृति क्षमताओं का आकलन करता है। चरण-दर-चरण प्रोटोकॉल संज्ञानात्मक सुधार के लिए एक्यूपॉइंट्स और सुइयों का सही पता लगाने और स्थिति पर विस्तृत निर्देश प्रदान करता है। इस प्रोटोकॉल को नियोजित करके, शोधकर्ता संज्ञानात्मक शिथिलता के लिए एक्यूपंक्चर की चिकित्सीय क्षमता का अच्छी तरह से मूल्यांकन करने के लिए व्यवस्थित अध्ययन कर सकते हैं।

Introduction

वैश्विक आबादी वर्तमान में एक महत्वपूर्ण उम्र बढ़ने की समस्या का सामना कर रही है, जिसके परिणामस्वरूप संज्ञानात्मक विकारों के प्रसार में तेजी से वृद्धि हुई है। संज्ञानात्मक हानि की विश्वव्यापी घटना लगभग 53.97 प्रति 1000 व्यक्ति-वर्षहै 1. संवहनी शिथिलता या संचार / श्वसन विकारों के कारण क्रोनिक सेरेब्रल हाइपोक्सिया उम्र से संबंधित मनोभ्रंश के लिए प्रमुख जोखिम कारकों में से एकहै। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि मस्तिष्क हाइपोक्सिया BACE1 अभिव्यक्ति 3 को संशोधित करके अमाइलॉइड-β जमाव को बढ़ा सकताहै। इसके साथ ही, हाइपोक्सिया ग्लियाल सेल dysregulation और neuroinflammation 4,5 के साथ जुड़ा हुआ है. इस मुद्दे की बढ़ती भयावहता के बावजूद, पुरानी हाइपोक्सिया-प्रेरित संज्ञानात्मक गिरावट को रोकने के लिए प्रभावी पश्चिमी दवाओं की वर्तमान में कमी है। गैर-औषधीय पारंपरिक चीनी चिकित्सा, विशेष रूप से एक्यूपंक्चर, संज्ञानात्मक विकारों के इलाज के लिए हजारों वर्षों से उपयोग किया जाता है और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों 6,7 को कम करने में आशाजनक परिणाम दिखाए हैं। Baihui, Shenting, और Zusanli acupoints संज्ञानात्मक रोग 8,9 के इलाज के लिए प्रभावी अंक हैं. नैदानिक अध्ययनों से पता चला है कि इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर थेरेपी काफी संवहनी संज्ञानात्मक हानि के साथ रोगियों में मॉन्ट्रियल संज्ञानात्मक आकलन (MoCA) और मिनी मानसिक राज्य परीक्षा (MMSE) स्कोर में सुधार और प्रभावी ढंग से संज्ञानात्मक रोग8 में सुधार. हालांकि अध्ययनों ने सुझाव दिया है कि एक्यूपंक्चर धमनी बंधाव के साथ चूहों की स्मृति क्षमता में काफी वृद्धि कर सकता है-एक तीव्र सेरेब्रल हाइपोक्सिया मॉडल10, एक तीव्र मस्तिष्क हाइपोक्सिया मॉडल, क्रोनिक हाइपोक्सिया-प्रेरित संज्ञानात्मक विकारों के साथ किसी भी कृंतक मॉडल में एक्यूपंक्चर के प्रभावों पर कोई रिपोर्ट नहीं है। तंत्र में अनुसंधान की कमी ने इसके नैदानिक अनुप्रयोग को काफी बाधित किया है।

पिछले शोध से पता चला है कि 8 सप्ताह की अवधि के लिए एक हाइपोक्सिक वातावरण के लिए चूहों के अधीन काफी स्मृति समारोह11 में गिरावट में जिसके परिणामस्वरूप, मस्तिष्क में ऑक्सीडेटिव तनाव और सूजन के स्तर को बढ़ा सकते हैं. वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य हमारी समझ को आगे बढ़ाने के लिए कृंतक मॉडल पर एक्यूपंक्चर के प्रभाव की जांच करना है। हालांकि, यह ध्यान देने योग्य है कि बार-बार उत्तेजना के दौरान आंदोलन की संभावना के कारण कृन्तकों में एक्यूपंक्चर उपचार के दौरान आमतौर पर संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है। लंबे समय तक संज्ञाहरण काफी चूहों में संज्ञानात्मक समारोह को प्रभावित कर सकते हैं, के रूप में सबसे संवेदनाहारी दवाओं तंत्रिका गतिविधि को दबाने और सूचना प्रसंस्करण में बाधा, व्यवहार घाटे12 के लिए अग्रणी. कई अध्ययनों से पता चला है कि 6 घंटे की अवधि के लिए 2.5% sevoflurane प्रशासन विशेष रूप से स्थानिक स्मृति, सीखने की क्षमता, और चूहों13 में ध्यान ख़राब कर सकते हैं. इसके अलावा, सबूत बताते हैं कि संज्ञाहरण की उच्च खुराक चूहों14 में न्यूरोनल मौत या तंत्रिका क्षति में परिणाम हो सकता है. इसलिए, उपयोग किए गए संज्ञाहरण की कुल मात्रा को कम करने के लिए एक उपयुक्त दृष्टिकोण की पहचान करना अनिवार्य है। इस अध्ययन में, हम संज्ञानात्मक हानि के साथ चूहों के इलाज के लिए एक प्रभावी एक्यूपंक्चर विधि पेश करते हैं, साथ ही उनकी स्मृति क्षमताओं का आकलन करने के लिए व्यवहार परीक्षण भी करते हैं। महत्वपूर्ण बात, हम एक संशोधित पूर्व उपचार संज्ञाहरण तकनीक है कि प्रभावी ढंग से प्रयोग के दौरान प्रशासित संज्ञाहरण की कुल खुराक को कम कर सकते हैं प्रस्तुत करते हैं.

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Protocol

पशु प्रयोगों हेबै यिलिंग मेडिकल रिसर्च इंस्टीट्यूट (अनुमोदन संख्या: N2022148) के पशु अनुसंधान और नैतिकता पर समिति के अनुमोदन के साथ आयोजित किए गए थे। 18-22 ग्राम वजन वाले नर C57BL/6J चूहों ( सामग्री की तालिकादेखें) को हेबै यिलिंग मेडिकल रिसर्च इंस्टीट्यूट के नए दवा मूल्यांकन केंद्र में रखा गया था। उन्हें सामान्य भोजन और साफ पानी दिया जाता था और रोजाना 12 घंटे के लिए कृत्रिम रोशनी के संपर्क में रखा जाता था। कमरों ने 20-26 डिग्री सेल्सियस की नियंत्रित तापमान सीमा और 40% -70% की सापेक्ष आर्द्रता बनाए रखी।

1. एक पुरानी हाइपोक्सिया माउस मॉडल की स्थापना (चित्रा 1)

  1. प्रयोग शुरू करने से पहले, एक निरंतर कम ऑक्सीजन वातावरण के साथ सामान्य वायुमंडलीय दबाव और पिंजरों के तहत पशु पिंजरों को तैयार करते हैं। शुद्ध ऑक्सीजन और नाइट्रोजन के मिश्रण के साथ कक्ष को फ्लश करने के लिए एक स्वचालित गैस नियंत्रण वितरण प्रणाली का उपयोग करके एक निरंतर कम ऑक्सीजन वातावरण स्थापित करें।
    नोट: इस प्रणाली को विद्युत चुम्बकीय वाल्व स्विच को नियंत्रित करने के लिए प्रोग्राम किया गया है, जिससे समय और एकाग्रता दोनों के संदर्भ में गैस की सटीक डिलीवरी सुनिश्चित होती है।
  2. चूहों को बेतरतीब ढंग से तीन समूहों में विभाजित करें: एक नियंत्रण समूह (कॉन), एक मॉडल समूह (सीएच), और एक इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर समूह (ईए + सीएच)। प्लेस नियंत्रण और मॉडल / इलेक्ट्रो एक्यूपंक्चर चूहों अलग से दो पिंजरों में, पिंजरे प्रति 10 चूहों के साथ. प्रकाश चक्र को 12 घंटे/12 घंटे (प्रकाश/अंधेरे) पर बनाए रखें।
    नोट: नियंत्रण समूह (कॉन) में कोई उपचार या हाइपोक्सिया प्रेरित नहीं है। मॉडल समूह (सीएच) में क्रोनिक हाइपोक्सिया वाले चूहे होते हैं। इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर समूह (ईए + सीएच) में इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर के साथ इलाज किए गए हाइपोक्सिया-प्रेरित चूहों शामिल हैं।
  3. क्रोनिक हाइपोक्सिया विकसित करने के लिए, गैस प्रवाह दर को विनियमित करने और 10% की ऑक्सीजन एकाग्रता बनाए रखने के लिए डिजिटल ऑक्सीजन मीटर का उपयोग करके कम ऑक्सीजन कक्ष के मापदंडों को स्थापित करें। जानवरों को सुबह 9:00 बजे कम ऑक्सीजन कक्ष के भीतर रखें और उन्हें शाम 5:00 बजे हटा दें, जिसके परिणामस्वरूप 3 महीने के लिए प्रति दिन कम ऑक्सीजन के निर्बाध संपर्क के कुल 8 घंटे हों।
    नोट: ऑक्सीजन एकाग्रता को कम करने के लिए नाइट्रोजन गैस की डिलीवरी की स्थापना करते समय, एक बार में नाइट्रोजन गैस के अत्यधिक परिचय को रोकने के लिए धीरे-धीरे आगे बढ़ने की सलाह दी जाती है, क्योंकि इससे पशु मृत्यु हो जाएगी।
  4. ऊतक विज्ञान परीक्षा और व्यवहार परीक्षणों का उपयोग कर क्रोनिक हाइपोक्सिया-प्रेरित संज्ञानात्मक शिथिलता मॉडल का मूल्यांकन करें: खुले क्षेत्र परीक्षण15 और पानी भूलभुलैया परीक्षण16.

2. संज्ञाहरण (चित्रा 2)

  1. छोटे पशु संज्ञाहरण मशीन ( सामग्री की तालिकादेखें) और निरंतर तापमान हीटिंग पैड तैयार करें।
    नोट: संज्ञाहरण के दौरान, जानवरों को हाइपोथर्मिया के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं, इन्सुलेशन के लिए एक निरंतर तापमान हीटिंग पैड को नियोजित करने की आवश्यकता को रेखांकित करते हैं।
  2. माउस को एनेस्थीसिया इंडक्शन बॉक्स में रखें और जल्दी से लगभग 1 मिन के लिए ऑक्सीजन में 2% -2.5% आइसोफ्लुरेन के साथ प्रेरित करें ( सामग्री की तालिकादेखें)।
    नोट: यह अल्पकालिक पूर्व उपचार यह सुनिश्चित करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है कि चूहों समय की एक विस्तारित अवधि के लिए कम एकाग्रता खुराक के तहत पनप सकते हैं.
  3. एक बार जब उनकी उत्तेजना कम हो जाती है, तो अपने पलटा की जांच करने के लिए माउस के पैर की अंगुली को चुटकी लें। फिर, निरंतर तापमान हीटिंग पैड (37 डिग्री सेल्सियस) पर माउस हस्तांतरण.
  4. संज्ञाहरण प्रवाह दर को लगभग 0.5% एकाग्रता में समायोजित करें। एनेस्थीसिया मशीन को माउस के मुंह और नाक से कनेक्ट करें। संज्ञाहरण के रखरखाव को सुनिश्चित करते हुए इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार के साथ आगे बढ़ें।
    नोट: संज्ञाहरण के प्रभाव की पुष्टि की गई जब चूहों ने पलक झपकना बंद कर दिया। संज्ञाहरण का प्रभाव कम से कम 30 मिनट तक रह सकता है।

3. इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार

  1. संज्ञानात्मक शिथिलता को प्रभावी ढंग से सुधारने के लिए, पारंपरिक चीनी चिकित्सा सिद्धांत और नैदानिक अनुभव(चित्रा 3)के आधार पर बाईहुई (जीवी 20), शेंटिंग (जीवी 24), और द्विपक्षीय ज़ुसानली (एसटी 36) जैसे विशिष्ट एक्यूपॉइंट्स का चयन करें। मॉडलिंग प्रक्रिया के पूरा होने से 2 सप्ताह पहले इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार का प्रशासन करें।
    1. कानों की युक्तियों को जोड़ने वाली रेखा के मध्य बिंदु पर, माथे की मध्य रेखा पर GV20 एक्यूपॉइंट का पता लगाएँ7. एक्यूपंक्चर सुई सम्मिलन की गहराई 2 मिमी होनी चाहिए।
    2. माथे 17 की मध्य रेखा पर माउस की आंखों के मध्य बिंदु के ऊपर GV24 एक्यूपॉइंट1.3 मिमी का पता लगाएँ। एक्यूपंक्चर सुई सम्मिलन की गहराई 2 मिमी होनी चाहिए।
    3. घुटने के जोड़ के बाहर ST36 एक्यूपॉइंट का पता लगाएँ, फाइबुला18,19 के सिर से लगभग 2 मिमी नीचे। एक्यूपंक्चर सुई सम्मिलन की गहराई 3-4 मिमी होनी चाहिए।
  2. प्रक्रिया के लिए डिस्पोजेबल एक्यूपंक्चर सुई ( सामग्री की तालिकादेखें) और एक इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर डिवाइस ( सामग्री की तालिकादेखें) तैयार करें (चित्र 4)।
  3. 0.5% isoflurane के साथ हल्के संज्ञाहरण के तहत प्रवण स्थिति में माउस प्लेस, सुनिश्चित करें कि उनके सिर और अंगों immobilized रहे हैं. अंगूठे, तर्जनी और मध्यमा उंगली का उपयोग करके, दाहिने हाथ से एक स्टेनलेस-स्टील सुई (व्यास: 0.18 मिमी; लंबाई: 7 मिमी) पकड़ें।
  4. जीवी 20 और जीवी 24 एक्यूपॉइंट पर 2 मिमी गहराई के लिए अनुप्रस्थ रूप से एक्यूपंक्चर करें, बाएं हाथ से माउस के सिर पर त्वचा उठाएं। माउस के घुटने के जोड़ के पार्श्व पक्ष पर फाइबुलर सिर को छूकर और बाएं अंगूठे से त्वचा पर दबाकर 3-4 मिमी गहराई के लिए ST36 एक्यूपॉइंट को लंबवत रूप से पंचर करें।
    नोट: सिर पर स्थित एक्यूपॉइंट्स के लिए, GV24 के अनुक्रम में सुइयों को GV20 के बाद डालने की सलाह दी जाती है। यह आदेश परिचालन सुविधा की सुविधा प्रदान करता है। एक्यूपंक्चर बिंदु स्थिर बिंदुओं के बजाय असतत शारीरिक स्थान हैं। नतीजतन, सुई सम्मिलन के कोण में मामूली विचलन चिकित्सीय प्रभावशीलता पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है, इसी तरह नैदानिक सेटिंग्स में इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार प्राप्त करने वाले रोगियों में देखा जाता है।
  5. इलेक्ट्रॉनिक एक्यूपंक्चर डिवाइस को सुइयों से कनेक्ट करें, GV20 और बाएं ST36 एक इलेक्ट्रोड सेट और GV24 से जुड़ा है और दाएं ST36 दूसरे से जुड़ा है (चित्र 4)। 2 एमए की विद्युत प्रवाह तीव्रता और 2 हर्ट्ज20,21 की आवृत्ति के साथ निरंतर तरंग मोड का चयन करें। माउस द्वारा एक्यूपॉइंट्स और शांत सहिष्णुता पर स्थानीय हल्के झटके देखकर आदर्श उपचार की पुष्टि करें।
    1. विद्युत एक्यूपंक्चर उपकरण को जोड़ते समय, सुई के समीपस्थ अंत को कनेक्ट करें। यह कनेक्शन लाइन के वजन के कारण होने वाले प्रभाव को कम करने में मदद करता है और परिणामस्वरूप सुई टुकड़ी की रोकथाम में सुधार करता है। यदि आवश्यक हो, तो क्षैतिज रूप से डाली गई सुई और कनेक्शन लाइन को सुरक्षित करने के लिए चिपकने वाली टेप का उपयोग करें।
  6. प्रत्येक उपचार चक्र के बीच आराम के एक दिन के साथ, लगातार 6 दिनों के लिए प्रत्येक दिन 30 मिनट के लिए दैनिक उपचार का प्रशासन करें।

4. ओपन फील्ड टेस्ट (चित्र 5)

नोट: खुले क्षेत्र परीक्षण एक पारंपरिक विधि है जिसका उपयोग स्वायत्त व्यवहार, खोजपूर्ण व्यवहार, संज्ञानात्मक क्षमताओं और उपन्यास और अपरिचित वातावरण22 में प्रयोगात्मक जानवरों के चिंता व्यवहार का आकलन करने के लिए किया जाता है। इसमें एक ओपन-फील्ड रिएक्शन बॉक्स और एक रिकॉर्डिंग डिवाइस होता है।

  1. परीक्षण करने के लिए, 50 सेमी × 50 सेमी × 30 सेमी मापने वाला एक सफेद दीवार वाला घन तैयार करें, जिसमें नीचे 10 सेमी × 10 सेमी मापने वाले 25 बराबर वर्गों में विभाजित किया गया है।
  2. अनुकूलन के लिए खुले क्षेत्र प्रतिक्रिया बॉक्स में माउस रखें. माउस परीक्षण कक्ष का पता लगाने और अनुकूलन अवधि के दौरान नए वातावरण के साथ परिचित करने के लिए अनुमति दें. 1 घंटे के लिए प्रयोगात्मक वातावरण के लिए माउस acclimating के बाद खुले क्षेत्र परीक्षण का आयोजन.
    नोट: यह पर्यावरण में परिवर्तन से प्रेरित चिंता या तनाव को कम करने की गारंटी देता है, इस प्रकार बाद के व्यवहार आकलन के दौरान अधिक सटीक परिणामों को सक्षम करता है।
  3. बॉक्स के केंद्र में माउस प्लेस और माउस 2 मिनट के लिए पर्यावरण के अनुकूल करने के लिए अनुमति देने के बाद 10 मिनट के लिए यह निगरानी.
    1. माउस के आंदोलन प्रक्षेपवक्र को रिकॉर्ड करने के लिए एक वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम ( सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करें, कुल दूरी की यात्रा, केंद्रीय क्षेत्र में बिताया गया समय, केंद्रीय क्षेत्र को पार करने की गति और परीक्षण के दौरान केंद्रीय क्षेत्र में प्रविष्टियों की संख्या।
    2. वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम के उत्पाद मैनुअल में दिए गए निर्देश के अनुसार प्रासंगिक संचालन करें। प्रत्येक माउस एक एकल परीक्षण से गुजरता है और बॉक्स के भीतर एक ही स्थान से अन्वेषण शुरू करता है।
    3. प्रत्येक परीक्षण के बाद, माउस का उपयोग करते समय गंध हस्तक्षेप के कारण होने वाले किसी भी झूठे परिणाम को रोकने के लिए 75% इथेनॉल के साथ खुले क्षेत्र के बॉक्स को साफ करें।

5. पानी भूलभुलैया (चित्रा 5)

नोट: पानी भूलभुलैया परीक्षण अक्सर उनके स्थानिक सीखने औरस्मृति क्षमताओं 23 का मूल्यांकन करने के लिए चूहों से जुड़े प्रयोगों में एक व्यवहार मूल्यांकन उपकरण के रूप में कार्यरत है.

  1. 120 सेमी व्यास और 30 सेमी की गहराई के साथ एक गोलाकार पानी की टंकी तैयार करें। टैंक को चार बराबर चतुर्थांशों में विभाजित करें: I, II, III और IV। प्रयोग में काले चूहों का उपयोग कर रहे हैं, एक सफेद पानी की टंकी का उपयोग करें; सफेद चूहों के लिए, एक काले पानी की टंकी का उपयोग करें।
  2. परीक्षण के दौरान शोधकर्ताओं को देखने से माउस को रोकने के लिए परिपत्र पानी की टंकी के चारों ओर पर्दे रखें.
  3. स्थानिक अभिविन्यास के लिए दृश्य संकेत के रूप में पानी की टंकी की ऊपरी सतह पर विभिन्न मार्करों स्थिति. सुनिश्चित करें कि इन मार्करों स्थिरता बनाए रखने के लिए प्रयोग के दौरान स्थिर रहते हैं.
  4. निर्दिष्ट लक्ष्य क्षेत्र के रूप में पानी की टंकी के चतुर्थांश III में 10 सेमी के व्यास के साथ एक गोलाकार मंच स्थित करें। सुनिश्चित करें कि प्लेटफॉर्म को आसानी से स्थानांतरित किया जा सकता है और किसी भी वांछित स्थान पर सुरक्षित किया जा सकता है।
  5. प्रयोग के दौरान, 22-24 डिग्री सेल्सियस की तापमान सीमा बनाए रखते हुए टैंक में पानी का परिचय दें।
    1. सुनिश्चित करें कि जल स्तर लक्ष्य मंच से लगातार 1 सेमी ऊपर रहता है। काले चूहों और सफेद पृष्ठभूमि के बीच एक अलग विपरीत प्राप्त करने के लिए पानी में गैर विषैले टाइटेनियम डाइऑक्साइड की 20% एकाग्रता शामिल करें। यह कंट्रास्ट माउस के आंदोलनों और प्रासंगिक मापदंडों की कैमरे की रिकॉर्डिंग की सुविधा प्रदान करता है।
  6. क्रमिक रूप से चतुर्थांश I, II, III, और IV में प्रत्येक माउस रखकर 5-दिवसीय निरंतर स्थानिक अन्वेषण परीक्षण का संचालन करें।
    1. माउस को दीवार का सामना करना पड़ स्थिति. एक संदर्भ बिंदु के रूप में प्रयोगकर्ता की स्थिति का उपयोग करने से माउस को रोकने के लिए भूलभुलैया से दूर ले जाएँ. माउस को प्लेटफ़ॉर्म खोजने में लगने वाला समय रिकॉर्ड करें।
    2. यदि माउस 90 s के भीतर पानी के नीचे के प्लेटफॉर्म का पता लगाने में विफल रहता है, तो माउस को प्लेटफॉर्म पर गाइड करें और 30-s सीखने की अवधि प्रदान करें। इसके अतिरिक्त, विलंबता अवधि को 90 s के रूप में रिकॉर्ड करें।
    3. माउस 90 एस के भीतर पानी के नीचे मंच का पता लगाता है, तो यह पानी की टंकी से हटाने से पहले सीखने के लिए 10 एस के लिए मंच पर रहने दें.
    4. एक तौलिया के साथ माउस सूखी और यह अपने पिंजरे में वापस.
    5. प्रत्येक 20 मिनट में प्रत्येक चतुर्थांश में प्रत्येक माउस के प्लेसमेंट घुमाएँ. वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम ( सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करके प्रत्येक माउस की तैराकी दूरी, गति और प्लेटफ़ॉर्म (विलंबता अवधि) को खोजने में लगने वाले समय को रिकॉर्ड करें, उत्पाद मैनुअल में दिए गए निर्देश के अनुसार प्रासंगिक संचालन करें।
    6. मंच को दिन 1 पर पानी की सतह से 1 सेमी ऊपर सेट करें। प्लेटफॉर्म को 2-5 दिनों में पानी की सतह से 1 सेमी नीचे की गहराई पर रखें।
  7. 6 दिन, लक्ष्य चतुर्थांश से मंच को हटा दें और एक स्थानिक अन्वेषण परीक्षण करें।
    1. 90 s के लिए स्वतंत्र रूप से अन्वेषण करने के लिए चतुर्थांश I में माउस रखें। कंप्यूटर माउस के तैरने प्रक्षेपवक्र, लक्ष्य चतुर्थांश में बिताए गए समय और प्लेटफॉर्म को पार करने की संख्या को रिकॉर्ड करता है।
      नोट: मानव कारकों के कारण प्रयोगात्मक त्रुटियों को कम करने के लिए, पानी भूलभुलैया प्रयोग में तय संदर्भ बिंदु की स्थिति को बनाए रखना महत्वपूर्ण है। इसके अतिरिक्त, प्रयोगकर्ता को माउस को पानी में रखने के तुरंत बाद पीछे हटना चाहिए। प्रयोग पूरा होने के बाद, चूहों को एक तौलिया के साथ सुखाया जाना चाहिए और गर्मी बनाए रखने के लिए अपने पिंजरों में वापस रखा जाना चाहिए।

6. हेमेटोक्सिलिन और ईोसिन (एचई) धुंधला (चित्रा 6)

नोट: हिप्पोकैम्पस क्षेत्र की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा हाइपोक्सिया मॉडल की स्थापना का आकलन करने और एक्यूपंक्चर उपचार की प्रभावकारिता का निर्धारण करने में सहायता करती है।

  1. व्यवहार प्रयोग के बाद, माउस को 20 मिलीग्राम/किग्रा पेंटोबार्बिटल सोडियम के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के साथ एनेस्थेटाइज करें और इसे पूर्ण शरीर छिड़काव सुनिश्चित करने के लिए 10% पैराफॉर्मलाडेहाइड समाधान ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ छिड़कें। मस्तिष्क के ऊतकों को अलग करें और निर्धारण प्राप्त करने के लिए 3 दिनों के लिए कमरे के तापमान (आरटी) पर 10% पैराफॉर्मलाडेहाइड समाधान में इसे विसर्जित करें।
  2. एक एम्बेडिंग बॉक्स में मस्तिष्क के नमूने रखें. इसके बाद, 6 घंटे के लिए बहते पानी के साथ संसाधित मस्तिष्क के नमूने धो लें।
  3. बढ़ती सांद्रता के साथ अल्कोहल समाधान की एक श्रृंखला का उपयोग करके नमूनों को निर्जलित करने के लिए एक स्वचालित ऊतक प्रोसेसर को नियोजित करें, अर्थात्, 1 घंटे के लिए 60% इथेनॉल, 1 घंटे के लिए 70% इथेनॉल, 1 घंटे के लिए 90% इथेनॉल, 2 घंटे के लिए 95% इथेनॉल, और अंत में, 2 घंटे के लिए 100% इथेनॉल।
  4. पारदर्शिता प्राप्त करने के लिए 2 घंटे के लिए xylene में ऊतक नमूनों विसर्जित करें. इसके बाद, निर्जलीकरण प्रक्रिया के पूरा होने के बाद, पारगम्य नमूनों को पैराफिन मोम में स्थानांतरित करें जो 3 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस तक गरम किया जाता है। अंत में, उन्हें एक स्वचालित प्रोसेसर में एम्बेड करें।
  5. 4 माइक्रोन वर्गों को प्राप्त करने के लिए एक रोटरी स्लाइसर का उपयोग करें। इसके बाद, 3-8 मिनट से लेकर अवधि के लिए हेमेटोक्सिलिन धुंधला हो जाना के लिए वर्गों के अधीन, 1-3 मिनट के लिए ईोसिन धुंधला के बाद।
  6. क्रमिक रूप से शुद्ध शराब और जाइलीन के कंटेनरों को अलग करने के लिए दाग वर्गों को स्थानांतरित करें। फिर, सील और एक ऑप्टिकल खुर्दबीन के तहत रोग परीक्षा के लिए तैयारी में तटस्थ गम के साथ दाग वर्गों सुरक्षित.
  7. स्लाइस को स्कैन करने के लिए एक स्लाइड स्कैनर ( सामग्री की तालिकादेखें) को नियोजित करें। इसके बाद, हिप्पोकैम्पस क्षेत्र के लिए एचई धुंधला परिणाम प्राप्त करने के लिए देखने के सॉफ्टवेयर का उपयोग करें। न्यूरॉन्स की व्यवस्था और न्यूरोनल नाभिक के संघनन की तुलना करें।

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Representative Results

खुले मैदान के प्रयोग में माउस हरकत प्रक्षेपवक्र की विशेषता
प्रक्षेपवक्र मानचित्र से पता चलता है कि सामान्य समूह में चूहे अपरिचित वातावरण में अन्वेषण के लिए गहरा झुकाव प्रदर्शित करते हैं। उनकी गतिविधि प्रक्षेपवक्र मुख्य रूप से पूरे खुले मैदान (बाएं पैनल) को कवर करते हुए कोनों में केंद्रित होते हैं। इसके विपरीत, चूहों के दीर्घकालिक हाइपोक्सिया मॉडल समूह उपन्यास परिवेश का पता लगाने के लिए काफी कम इच्छा प्रदर्शित करता है। वे मुख्य रूप से खुले मैदान (मध्य पैनल) के केंद्र की ओर किसी भी खोजपूर्ण व्यवहार का प्रदर्शन किए बिना कोनों में घूमते हैं। एक्यूपंक्चर उपचार के बाद, हाइपोक्सिया-प्रेरित चूहों की खोजपूर्ण गतिविधि में सुधार दिखाई देता है, और खुले मैदान के केंद्र की ओर जाने का उनका व्यवहार बहाल किया जाता है (दायां पैनल)(चित्रा 5ए)।

चूहों में स्थानिक सीखने और स्मृति की विशेषता
सामान्य समूह में, चूहों लक्ष्य चतुर्थांश में समय की एक अपेक्षाकृत अधिक राशि खर्च की और अधिक बार मंच पार, के रूप में प्रक्षेपवक्र नक्शा (बाएं पैनल) में दिखाया गया है. चूहों के दीर्घकालिक हाइपोक्सिक मॉडल समूह ने सामान्य समूह की तुलना में कमजोर स्थानिक स्मृति क्षमताओं का प्रदर्शन किया, जैसा कि निर्दिष्ट समय (मध्य पैनल) के भीतर लक्ष्य चतुर्थांश का पता लगाने में असमर्थता से संकेत मिलता है। एक्यूपंक्चर उपचार के बाद, चूहों ने अपने हाइपोक्सिया-प्रेरित स्थानिक स्मृति क्षमताओं में महत्वपूर्ण सुधार दिखाया। उन्होंने अधिक संगठित खोजपूर्ण व्यवहार प्रदर्शित किया और लक्ष्य चतुर्थांश(दाएं पैनल)(चित्रा 5बी)में काफी लंबा समय बिताया।

माउस मस्तिष्क की ऊतकीय परीक्षा
नियंत्रण समूह में, चूहों (ऊपरी बाएं पैनल) के हिप्पोकैम्पस क्षेत्र में न्यूरॉन्स की व्यवस्था ने नियमितता का प्रदर्शन किया, जबकि यह दीर्घकालिक हाइपोक्सिक मॉडल समूह (ऊपरी दाएं पैनल) में बाधित था। इसके विपरीत, उपचार समूह ने न्यूरॉन्स (निचले पैनल) की व्यवस्था में सुधार का प्रदर्शन किया। इसके अलावा, मॉडल समूह ने नियंत्रण समूह की तुलना में माउस न्यूरोनल नाभिक के संकोचन को प्रदर्शित किया, लेकिन इस प्रभाव को उपचार समूह में आंशिक रूप से कम किया गया था। (चित्र 6)।

Figure 1
चित्रा 1: हाइपोक्सिया प्रेरित संज्ञानात्मक हानि के लिए एक माउस मॉडल की स्थापना। चूहों को दिन 1 से दिन 90 तक हाइपोक्सिया से अवगत कराया गया था। इलेक्ट्रिक एक्यूपंक्चर थेरेपी को 75 दिन से दैनिक रूप से प्रशासित किया गया था, जिसमें प्रत्येक उपचार चक्र 6 दिनों तक चलता था और कुल 2 उपचार चक्र होते थे। चक्रों के बीच 1 दिन का ब्रेक था। व्यवहार परीक्षण 93 वें दिन आयोजित किया गया था। हिप्पोकैम्पस क्षेत्र में मॉडल की स्थापना की पुष्टि करने के लिए 65 दिन पर हिस्टोलॉजिकल परीक्षा और व्यवहार परीक्षण आयोजित किया जा सकता है। संक्षिप्ताक्षर: सोम: महीना। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर से पहले संज्ञाहरण पूर्व उपचार। इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार से गुजरने से पहले, चूहों को (ए) संज्ञाहरण उपकरण का उपयोग करके संवेदनाहारी किया गया था। चूहों तो कक्ष में (सी) 2% Isoflurane के साथ एक (बी) कक्ष बॉक्स में रखा गया. (डी) संशोधित संज्ञाहरण विधि की अवधि शास्त्रीय संज्ञाहरण विधि की तुलना में कम थी। (ई) हल्के संज्ञाहरण के अधीन चूहों पैर उत्तेजना के लिए उनकी प्रतिक्रिया को बनाए रखने. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: माउस सिर पर एक्यूपंक्चर अंक की शारीरिक संरचना। यह आंकड़ा चूहों में GV20 (Baihui), GV24 (Shenting), और ST36 (Zusanli) की शारीरिक स्थिति को दर्शाता है। (ए) ललाट और पार्श्विका हड्डियों को दिखाते हुए माउस सिर का एक शारीरिक दृश्य। (बी) टिबिया, फाइबुला और फाइबुलर सिर दिखाते हुए माउस पैर का एक शारीरिक दृश्य। (सी) माउस सिर पर एक्यूपंक्चर अंक के स्थान. (डी) जीवी 20 माथे की मध्य रेखा पर, कानों की युक्तियों के बीच के मध्य बिंदु पर और सीधे पार्श्विका हड्डी के ऊपर स्थित है। GV24 माथे की मध्य रेखा पर स्थित है, ललाट और पार्श्विका हड्डियों के जंक्शन के ठीक पूर्वकाल। ST36 हिंद पैर के बाहरी तरफ, फाइबुलर सिर से लगभग 2 मिमी नीचे स्थित है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार। चूहों GV20 पर विशिष्ट बिंदुओं पर सुई उत्तेजना से गुजरना पड़ा (Baihui), GV24 (Shenting), और द्विपक्षीय ST36 (Zusanli) संज्ञाहरण के तहत. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार के बाद खुले क्षेत्र परीक्षण और पानी भूलभुलैया परीक्षण के प्रतिनिधि परिणाम। (ए) क्रोनिक हाइपोक्सिया (सीएच) और एक्यूपंक्चर (ईए) उपचार के अधीन चूहों में व्यवहार परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए ओपन फील्ड टेस्ट आयोजित किया गया था। परीक्षण से तीन प्रतिनिधि प्रक्षेपवक्र भूखंड उत्पन्न किए गए थे। (बी) पुरानी हाइपोक्सिया और एक्यूपंक्चर उपचार के अधीन चूहों की स्थानिक स्मृति का मूल्यांकन करने के लिए पानी भूलभुलैया परीक्षण आयोजित किया गया था। परीक्षण से तीन प्रतिनिधि प्रक्षेपवक्र भूखंड उत्पन्न किए गए थे। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्रा 6: इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर उपचार के बाद माउस मस्तिष्क की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा। नियंत्रण समूह (ऊपरी बाएं पैनल), हाइपोक्सिया समूह (ऊपरी दाएं पैनल), और उपचार समूह (निचले पैनल) में चूहों की हिस्टोलॉजिकल तस्वीरें। स्केल बार: 100 माइक्रोन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

एक्यूपंक्चर, 2,000 साल पहले चीन में उत्पन्न होने वाली एक गैर-औषधीय चिकित्सा पद्धति है, जिसमें शरीर पर विशिष्ट बिंदुओं में पतली सुइयों का सम्मिलन शामिल है जिसे एक्यूपंक्चर बिंदुओं के रूप में जाना जाता है। माना जाता है कि इन बिंदुओं को चैनलों या मेरिडियन द्वारा जोड़ा जाता है जिसके माध्यम से शरीर की महत्वपूर्ण ऊर्जा, या "क्यूई,"24 बहती है। इन बिंदुओं को उत्तेजित करके, एक्यूपंक्चर का उद्देश्य शरीर में संतुलन और सद्भाव बहाल करना है। यह पुराने दर्द, चिंता / अवसाद, पाचन समस्याओं, मासिक धर्म ऐंठन, और श्वसन विकारों 25,26,27,28,29सहित विभिन्न स्थितियों का प्रभावी ढंग से इलाज करने के लिए दिखाया गया है. हाल के वर्षों में, एक्यूपंक्चर संज्ञानात्मक शिथिलता सहित न्यूरोनल रोगों के लिए एक प्रभावी चिकित्सीय हस्तक्षेप के रूप में उभरा है। कई अध्ययनों ने न्यूरोट्रांसमीटर को संशोधित करने, मस्तिष्क रक्त प्रवाह को बढ़ाने, ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करने और न्यूरोप्लास्टी 20,30,31,32को बढ़ाने की क्षमता का प्रदर्शन किया है। नतीजतन, यह तेजी से एक सुरक्षित और प्रभावी उपचार विकल्प के रूप में मान्यता प्राप्त है, खासकर जब पारंपरिक चिकित्सा देखभाल33 के साथ प्रयोग किया जाता है. हालांकि, इसके लंबे इतिहास और व्यापक उपयोग के बावजूद, एक्यूपंक्चर की कार्रवाई का तंत्र अपूर्ण रूप से समझा जाता है। एक सिद्धांत का प्रस्ताव है कि एक्यूपंक्चर एंडोर्फिन की रिहाई को उत्तेजित करता है, शरीर के प्राकृतिक दर्द निवारक, जिससे दर्द को कम करने और कल्याण की भावना को बढ़ावा देने34. एक अन्य सिद्धांत से पता चलता है कि एक्यूपंक्चर स्वायत्त तंत्रिका तंत्र, जो विभिन्न अनैच्छिक शारीरिक कार्यों 35,36को नियंत्रित करता है को प्रभावित कर सकते हैं. यद्यपि एक्यूपंक्चर के तंत्र की हमारी समझ अभी भी विकसित हो रही है, वैज्ञानिकों के बीच बढ़ती मान्यता है कि एक्यूपंक्चर के लिए एक मानकीकृत प्रयोगशाला पद्धति, विशेष रूप से कृंतक मॉडल का उपयोग करके, इस क्षेत्र में अनुसंधान का मार्गदर्शन करने के लिए आवश्यक है।

एक उपयुक्त संज्ञाहरण प्रोटोकॉल का चयन एक माउस मॉडल में एक्यूपंक्चर के संचालन में प्रारंभिक महत्वपूर्ण कदम है। पारंपरिक प्रोटोकॉल में अक्सर निरंतर उच्च खुराक संज्ञाहरण शामिल होता है, जो माउस के तंत्रिका तंत्र पर महत्वपूर्ण प्रभाव डाल सकता है और एक्यूपंक्चर उपचार के बाद झूठे-नकारात्मक व्यवहार परीक्षण के परिणाम हो सकता है। इस अध्ययन में, हम एक बेहतर प्रोटोकॉल का प्रस्ताव करते हैं जो चूहों को गैस-एनेस्थेटाइज करने के लिए एक सीलबंद संज्ञाहरण बॉक्स का उपयोग करता है जब तक कि वे चेतना खो न दें। इसके बाद, एक्यूपंक्चर उपचार के दौरान कम खुराक संवेदनाहारी का उपयोग करके एक स्थिर स्थिति बनाए रखी जाती है। यह विधि अत्यधिक संज्ञाहरण खुराक के कारण कार्यात्मक और व्यवहार संबंधी असामान्यताओं को कम करने में मदद करती है और प्रयोगों की सटीकता को बढ़ाती है। इसके अतिरिक्त, शोधकर्ता केटामाइन और ज़ाइलज़ीन के बजाय आइसोफ्लुरेन का विकल्प चुन सकते हैं क्योंकि यह तेजी से वसूली का समय प्रदान करता है और केटामाइन और ज़ाइलाज़ीन37 से जुड़े प्रणालीगत विषाक्तता जोखिमों को कम करता है। हालांकि, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि संज्ञाहरण के कारण झूठे नकारात्मक परिणाम अभी भी हो सकते हैं। यहां तक कि हल्के संज्ञाहरण लगातार 2 सप्ताह के लिए जारी अनुभूतिअनुभूति 38 पर एक नकारात्मक प्रभाव हो सकता है. उपचार की प्रभावशीलता का अधिक सटीक मूल्यांकन करने के लिए, शोधकर्ता एनेस्थेटाइज्ड चूहों के एक अतिरिक्त समूह को शामिल कर सकते हैं जो तुलनात्मक उद्देश्यों के लिए कोई उपचार प्राप्त नहीं करते हैं। चूहों में एक्यूपंक्चर उपचार का एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू एक्यूपॉइंट्स के संयोजन का निर्धारण कर रहा है। मनुष्यों में केंद्रीय तंत्रिका तंत्र रोगों के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले एक्यूपॉइंट्स में बाईहुई (जीवी 20), यिंतांग (पूर्व-एचएन 3), शेंटिंग (जीवी 24), और ज़ुसानली (एसटी 36) 39,40,41 शामिल हैं। इस अध्ययन में, हमने उपचार के लिए बाईहुई (GV20), शेंटिंग (GV24), और ज़ुसानली (ST36) को शामिल करने पर ध्यान केंद्रित किया। एक्यूपॉइंट स्थानीयकरण में चूहों के छोटे आकार से उत्पन्न चुनौतियों के बावजूद, शारीरिक संरचनाओं के आधार पर संयुक्त स्थिति एक प्रभावी तरीका साबित होती है। अंत में, उचित उत्तेजना आवृत्ति और तीव्रता का निर्धारण चूहों में एक्यूपंक्चर उपचार प्रदर्शन में एक और महत्वपूर्ण कदम है. इस अध्ययन में, हमने 2 हर्ट्ज पर कम आवृत्ति इलेक्ट्रो-एक्यूपंक्चर और 2 एमए की मध्यम तीव्रता का उपयोग किया। यद्यपि एक्यूपंक्चर का चिकित्सीय परिणाम स्पष्ट है, इसके अंतर्निहित तंत्र को समझने के लिए आगे की खोज की आवश्यकता है।

न्यूरोलॉजिकल विकारों के उपचार में एक्यूपंक्चर के व्यापक संभावित अनुप्रयोगों के बावजूद, इस तकनीक की कुछ सीमाएं हैं। एक सीमा ऑपरेटर के अनुभव पर इसकी उच्च निर्भरता है, जिसके परिणामस्वरूप अनुभवहीन ऑपरेटरों द्वारा प्रदर्शन किए जाने पर प्रयोगात्मक विषयों को उप-इष्टतम परिणाम या नुकसान हो सकता है। एक और सीमा इसकी प्रभावशीलता को बढ़ाने के लिए नैदानिक एक्यूपंक्चर उपचार में सुधार की आवश्यकता है। वर्तमान में, शोधकर्ताओं औषधीय हस्तक्षेप और संज्ञानात्मक प्रशिक्षण के रूप में अन्य चिकित्सा, के साथ एक्यूपंक्चर के संयोजन का अध्ययन कर रहे हैं, क्रम में उपचार परिणामों42 में सुधार करने के लिए. इसके अतिरिक्त, तकनीकी प्रगति ने नई तकनीकों के विकास को जन्म दिया है, जैसे ट्रांसक्रैनियल चुंबकीय उत्तेजना (टीएमएस), जिसका उपयोग एक्यूपंक्चर के साथ संयोजन के रूप में संज्ञानात्मक कार्य43 को और बढ़ाने के लिए किया जा सकता है। इन सीमाओं के बावजूद, एक्यूपंक्चर ने विभिन्न न्यूरोलॉजिकल विकारों के उपचार में महत्वपूर्ण लाभ दिखाए हैं और भविष्य के अनुप्रयोगों के लिए काफी संभावनाएं रखते हैं, खासकर जब अन्य उपचारों के साथ संयुक्त। यह आलेख क्रोनिक हाइपोक्सिया प्रेरित संज्ञानात्मक हानि, एक्यूपंक्चर उपचार की प्रक्रिया, और व्यवहार परीक्षण विधियों के एक माउस मॉडल के निर्माण के लिए विस्तृत तरीके प्रदान करता है. ये विधियां शोधकर्ताओं को एक्यूपंक्चर के आवेदन और तंत्र पर गहन अध्ययन करने में सहायता कर सकती हैं, जिससे पारंपरिक चीनी चिकित्सा की उन्नति को बढ़ावा मिलता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को हेबै के एस एंड टी प्रोग्राम (नंबर E2020100001, और नंबर 22372502 डी), शीज़ीयाज़ूआंग (नंबर 07202203) के उच्च स्तरीय एस एंड टी इनोवेशन एंड एंटरप्रेन्योरशिप टैलेंट प्रोजेक्ट द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
10% paraformaldehyde solution Bioroyee (Beijing) Biotechnology Co., Ltd RL3234
ANY-maze Science  SA201 Video tracking system
C75BL/6J mice BEIJING HFK BIOSCIENCE CO.,LTD No.110322220103041767 Gender: Male,  Weight: 18–22 g
Electroacupuncture device Great Wall KWD-808 I
Hwato acupuncture  needle Suzhou Medical Appliance Factory 2655519 
Isoflurane RWD Life Science Co.,Ltd R510-22
NanoZoomer Digital Pathology Hamamatsu Photonics K. K C9600-01
Small animal anesthesia machine RWD YL-LE-A106

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References

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व्यवहार अंक 202 क्रोनिक हाइपोक्सिया संज्ञानात्मक हानि हल्के संज्ञाहरण गैर-औषधीय पारंपरिक चीनी चिकित्सा
क्रोनिक हाइपोक्सिया-प्रेरित संज्ञानात्मक रोग के माउस मॉडल में एक्यूपंक्चर उपचार
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