Træning af laboratoriekaniner til at forfine rutinemæssige opdrætsprocedurer

Summary

Træningsprotokoller, der involverede positiv forstærkning til rutinemæssige opdrætsprocedurer hos kaniner, blev udviklet og viste sig at være vellykkede, da kaninerne pålideligt viste den trænede adfærd ved den ugentlige generelle undersøgelse. At samle kaninerne op med transportkassen var mindre aversivt end den konventionelle håndteringsteknik.

Abstract

Der er behov for ikke-aversive håndterings- og uddannelsesteknikker for laboratoriedyr for at lette forsøgs- og rutineopdrætsprocedurer, hvilket forbedrer både dyrevelfærden og den videnskabelige kvalitet. Klikkertræning blev brugt til at udvikle træningsprotokoller for kaniner til at forfine stressende rutinemæssige opdrætsprocedurer, der normalt er forbundet med at løfte (dvs. blive samlet op fra gulvet) / fastholdelse (dvs. at blive holdt i armene på et menneske) dem. Tretten kvindelige New Zealand hvide kaniner blev trænet over tre uger. Alle kaniner lærte den foruddefinerede måladfærd: de fulgte målstokken, hoppede op på vejeskalaen, gik ind i en transportkasse og opdrættede, mens de placerede deres forpoter på trænerens hånd. Derudover sprang ti dyr fra gulvet op på den siddende træners skød og lod træneren løfte poterne fra overfladen, mens de sad på trænerens skød. For nogle individer måtte protokollerne tilpasses ved yderligere midlertidige skridt. Ved afslutningen af træningen viste kaninerne pålideligt de forventede måladfærd, selv efter korte og lange træningspauser. Med få undtagelser kunne en anden velkendt person end træneren fremkalde måladfærden fra kaninerne (generalisering), selvom yderligere sessioner var nødvendige for generalisering. I den frivillige tilgangstest foretrak kaninerne at interagere med træneren i 1^. forsøg, men tilbragte lige så meget tid med en ukendt person som med træneren i 2^{. forsøg.} De adfærdsmæssige observationer antydede, at det var mindre aversivt at samle kaninerne op med transportkassen, som beskrevet i protokollen, i stedet for at fastholde dem med halsen og løfte dem på armen. Alt i alt var træningsprotokollerne gennemførlige og kan tjene som en forfiningsstrategi i forsøgsdyrfaciliteter. Af hensyn til dyrevelfærden bør uddannelsesprotokollerne anvendes, hvor det er muligt.

Introduction

Mellem 2015 og 2019 blev mere end 49 millioner dyr anvendt til videnskabelige formål i Den Europæiske Union (og Norge). 1.745.037 (3,5 %) af dem var kaniner¹. Kaniner anvendes mest til lovpligtig forskning (f.eks. kvalitetskontrol, toksicitet og andre sikkerhedstest, herunder farmakologi) og rutinemæssig produktion af biologiske stoffer (f.eks. blodbaserede produkter)². Selv om der gøres en indsats for at erstatte dyreforsøg med dyrefrie metoder, er brugen af dyr stadig nødvendig til nogle af disse formål. Når et dyreforsøg ikke kan erstattes, er det afgørende at reducere antallet af dyr og forfine forsøgs- samt opstaldnings- og opdrætsforhold for at minimere lidelse. Russel og Burch beskrev denne strategi som 3R-princippet (erstatte, reducere, forfine) i 1959^{3 og} i 2010 blev den implementeret i direktiv 2010/63/EU om beskyttelse af forsøgsdyr, der anvendes til videnskabelige formål⁴. Forfiningens rolle, undertiden omtalt som 'Askepot' af 3R'erne⁵, har fået stigende betydning. Mens erstatning og reduktion er langsigtede strategier hen imod direktivets endelige mål om fuldt ud at erstatte dyreforsøg, muliggør forfinelse en øjeblikkelig forbedring af dyrevelfærden⁵, hvilket igen har potentiale til at forbedre den videnskabelige kvalitet⁶. Væsentlige dele af forfiningen er håndtering og uddannelse af dyr, jf. bilag III til direktiv 2010/63/EU. Direktivet fastsætter, at dyrefaciliteter skal udforme tilvænnings- og træningsprogrammer for forsøgsdyrene tilpasset arter, procedurer og projekt⁴. Bilag A til ETS nr. 123 antyder, at forsøgsdyrspersonalet bruger tid på at "tale med, håndtere, træne og pleje dyr"⁷.

Nogle håndteringsprocedurer forårsager stress, især for landbaserede byttedyr som kaniner. Eksempler er at blive hjørnet, fastholdt (dvs. grebet af et menneske, holdt i armene på et menneske eller immobiliseret af en enhed) og løftet (dvs. samlet op fra gulvet) til en sundhedsinspektion eller eksperimentelle procedurer⁸. En undersøgelse med fokus på kæledyrskaniner afslørede, at 57-61% af dem kæmpede, når de blev løftet ^9,10, og nogle viste endda frygtrelateret aggression (dvs. bid)¹¹. Dette understreger behovet for skånsomme håndterings- og træningsteknikker. Det er allerede blevet påvist for andre små pattedyr som mus, at skånsomme håndteringsteknikker mindsker angst¹². Desuden reducerer skånsom håndtering i kombination med træning stress, angst og depressionslignende adfærd hos mus¹³. Hos rhesusmakakker og chimpanser blev fysiologiske mål relateret til stress mindre påvirket, når de tidligere var trænet i en procedure ^14,15. Det kan antages, at hvis et dyr kan vælge at deltage i træningen frivilligt, kan det aktivt engagere sig i og kontrollere situationen, hvilket forbedrer dyrets velfærd og også kan bidrage til mere robuste og pålidelige videnskabelige data¹⁶.

Mange dyretræningsprocedurer er afhængige af operante konditioneringsprincipper, især brugen af positiv forstærkning og formning 17,18,19. Operant konditionering kræver, at et dyr fremkalder adfærd, der derefter kan øges eller formindskes²⁰. Der er fire almindelige uforudsete hændelser, der bruges til at beskrive operant konditionering: positiv og negativ forstærkning samt positiv og negativ straf^21,22. Hos kaniner anvendes positiv straf, når en person nærmer sig (uønsket stimulus) et dyr for at flytte det væk fra eller mod et bestemt sted²³. I forbindelse med håndtering af en kanin på undersøgelsesbordet er et eksempel på negativ forstærkning fjernelse af tryk (uønsket stimulus) på kaninens krop, når kaninen holder stille; Et eksempel på negativ straf er at trække en madbelønning (ønsket stimulus) tilbage, når kaninen begynder at kæmpe. Hverken positiv / negativ straf eller negativ forstærkning anbefales i dyretræning. Straf forårsager negative følelsesmæssige påvirkninger²⁴, såsom nød som vist hos hunde²⁵. I stedet bør positiv forstærkning være den foretrukne metode til træning af dyr^25,26. Positiv forstærkningstræning (PRT) betyder, at der gives en ønskelig stimulus (f.eks. En foderbelønning), efter at dyret viste en ønsket adfærd, hvilket øger sandsynligheden for, at dyret vil udvise den ønskede adfærd igen i fremtiden²⁷. PRT involverer ofte anvendelse af en konditioneret forstærker. En konditioneret forstærker (sekundær forstærker) er normalt en neutral stimulus såsom en lyd, som dyret lærer at forbinde med en ubetinget forstærker (primær forstærker, f.eks. foderbelønning)²⁸. Når dyret viser den ønskede adfærd, præsenteres den konditionerede forstærker straks efterfulgt af præsentationen af fødevarebelønningen²⁶. Et velkendt eksempel på PRT er klikkertræning, hvor en klikker bruges til at producere et klik som en sekundær forstærker²⁶.

Træningen skal følge forudsigelige mønstre, hvilket opnås ved at designe en træningsprotokol. Træningsprotokollen beskriver, hvordan en måladfærd kan nås trin for trin (dvs. adfærdsformning), mens hvert trin er defineret af objektive kriterier og let skal udføres²⁶. Hvis træningen følger en bestemt protokol, er det muligt, at forsøgsdyrspersonalet skiftevis træner dyrene. Det er vigtigt at bemærke, at personalet skal kende principperne for lærings- og træningsteknikker for at kunne anvende dem korrekt²⁶. Dyretræning inkorporerer ofte adfærdsformning. Adfærdsmæssig formning i hånden blev bevidst brugt for første gang af Skinner og kolleger i begyndelsen af 1940'erne²⁹. I modsætning hertil fokuserede Skinner i tidligere arbejde snarere på at "foretage små ændringer i det fysiske miljø for at gennemføre et program med successive tilnærmelser"²⁹. I en artikel offentliggjort i Scientific American forklarede han, at forstærkning af en adfærd øger sandsynligheden for, at adfærden gentages, hvilket "gør det muligt at forme et dyrs adfærd næsten som en billedhugger former en klump ler"³⁰. Siden da har formning oplevet stigende betydning for dyr i fangenskab 29,30,31,32. For at reproducere og forbedre formningsprotokoller er det afgørende at vurdere protokollerne på en systematisk og objektiv måde 33,34,35,36.

En nyligt offentliggjort systematisk gennemgang og metaanalyse af Pfaller-Sadovsky et al. fandt, at konditioneret forstærkning hyppigst blev undersøgt hos heste og hunde, selvom katte, kvæg, fisk, geder og ikke-menneskelige primater også blev undersøgt³⁷. Inden for laboratoriedyrevidenskab anvendes PRT i vid udstrækning til ikke-menneskelige primater 38,39,40 og hunde^41,42. Derudover blev svin⁴³, geder⁴⁴ og endda små pattedyr, såsom mus¹³ og rotter 45,46,47, med succes trænet ved hjælp af en klikker i laboratorieindstillingen. Så vidt forfatterne ved, er indførelsen af PRT for laboratoriekaniner kun sjældent rapporteret^{endnu 48}; Eksisterende peer-reviewed litteratur udgivet for flere årtier siden er forældet og opfylder ikke kriterierne for moderne etisk forskning. Selv om kun få ikke-peer-reviewed oplysninger tyder på, at kaniner kan trænes med succes ved hjælp af PRT⁴⁹, synes der at mangle viden om passende træningsprotokoller for kaniner, der er anbragt i laboratoriedyrsfaciliteter. De underliggende årsager kan variere. For eksempel kan de anvendte uddannelsesteknikker ikke beskrives detaljeret i forskningsartikler, eller data genereres til lovgivningsmæssig forskning og offentliggøres derfor ikke. Desuden er kaniner muligvis ikke hovedfokus for raffineringsforskning, da andre arter som mus og rotter hyppigere anvendes i forskning. Da kaniner kan maskere stress og ubehag ekstremt godt, kan deres negative følelsesmæssige tilstand, når de håndteres, ofte forblive ukendt. Størrelsen på en kanin gør det muligt for mennesker at holde disse dyr tilbage til forsøg, mens andre arter såsom ikke-menneskelige primater ikke må holdes med hænderne til lignende indgreb uden at blive alvorligt såret⁵⁰. Disse forhold bør dog ikke forhindre udvikling eller deling af PRT-protokoller for laboratoriekaniner.

Med hensyn til de potentielle fordele ved PRT blev der gjort første forsøg på at udfylde videnskløften om passende træningsprotokoller for laboratoriekaniner. For at lette rutinemæssige procedurer såsom håndtering, sundhedsinspektioner og vejning blev der udviklet træningsprotokoller, og deres gennemførlighed for kvindelige New Zealand hvide kaniner blev evalueret. Der blev foretaget sammenligninger for at vurdere, om den alternative håndteringsteknik, der blev beskrevet i træningsprotokollerne, var mindre aversiv end den konventionelle håndteringsteknik, og om træningsprotokollerne kan tjene som forfiningsforanstaltninger. Figur 1 viser tidsplanen for nærværende undersøgelse.

Vedligeholdelse af dyr

Tretten kvindelige New Zealand hvide kaniner blev opnået fra kommercielle kilder (ankomst til dyrefacilitet i en alder af ca. syv uger). Dyrene var fri for alle virale, bakterielle og parasitære patogener, der er anført i FELASA-anbefalingerne⁵¹. Beskyttelsesbeklædning og -udstyr (handsker, masker, hårnet) blev båret under udførelsen af trinnene i denne protokol. En gruppe på seks og en gruppe på syv dyr blev anbragt sammen i en gulvfold på henholdsvis 2,8 m × 2,8 m (gulvhus). Gulvet var dækket af fint og flaky træstrøelse materiale (autoklaveret). Desuden blev nestemateriale og papiruld spredt oven på strøelse. Tre plasthuse med to åbninger hver (37 cm × 60 cm; højde 30 cm) og en plasttunnel (længde: 58 cm; diameter: 16 cm) fungerede som beskyttelsesrum. Derudover blev der leveret berigelsesgenstande såsom trægnaveblokke, hø- og pilekugler og snackkugler fyldt med madpiller, der falder ud, når bolden flyttes. Kaninerne havde fri adgang til postevand, pelleteret mad og autoklaveret hø samt halm. Yderligere oplysninger om fødevarer og berigelsesprodukter er anført i materialetabellen. Dyrerummet blev rengjort om torsdagen.

Kaninerne blev opretholdt under standardbetingelser (stuetemperatur og relativ luftfugtighed angivet som gennemsnit ± standardafvigelse: 20,3 ± 0,4 °C og 50 ± 5 %) i en lys:mørk cyklus på 12:12 timer (kunstigt lys med yderligere dagslysforekomst). En radio blev tændt 30 minutter før begyndelsen af lysfasen i ca. 8 timer for at vænne kaninerne til omgivende lyde.

Protocol

Dyrenes vedligeholdelse blev godkendt af Berlins statslige myndighed ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", tilladelsesnummer: ZH3 - German Federal Institute for Risk Assessment, Berlin). Træningsprotokollerne blev udviklet inden for rammerne af det rutinemæssige husdyrhold for at forfine procedurer som håndtering, sundhedsinspektion og vejning. Da træningsprotokollerne ikke forårsagede smerte, lidelse eller skade, og alle observationer blev foretaget i forbindelse med rutinemæssig husdyrhold, blev denne undersøgelse ikke betragtet som et dyreforsøg i henhold til europæisk lovgivning.

1. Generelle krav til uddannelse

BEMÆRK: Følgende punkter er generelt påkrævet for dyretræning, uafhængigt af denne protokol.

1. Marker dyrene tydeligt til identifikation.
2. Sørg for at have en belønning af høj kvalitet, f.eks. meget velsmagende mad.
3. Definer træningsplanen, herunder alle trin mod måladfærden, dvs. den ønskede adfærd, dyret skal vise.
   BEMÆRK: Måladfærden formes trin for trin, mens hvert trin er defineret af objektive kriterier og skal let opnås.
4. Definer, om dyrene skal lykkes med at udføre 80% eller 100% af træningstrinnene, før du fortsætter med næste trin.
5. Forbered dokumentationen (f.eks. supplerende tabel 1).
6. Træn ikke dyrene, når du har travlt og pas på manerer, tonefald og bevægelseshastighed, dvs. tal blødt og roligt, bevæg dig langsomt og forudsigeligt.
7. Test de trin, der blev trænet i den forrige træning.
8. Træn ikke et dyr, når dyrets generelle sundhedstilstand er svækket, og/eller dyret ikke er interesseret i at interagere med træneren.

2. Træningsrutiner i henhold til denne protokol

BEMÆRK: Følgende træningsrutiner blev defineret for denne protokol.

1. Indstil træningsarenaen i dyrerummet/stien (figur 2), og placer vægten eller transportboksen (gulv 30 cm × 50 cm; dør 27 cm × 25,5 med en åbning i låget 16 cm × 39 cm) i arenaen, afhængigt af den måladfærd, der skal trænes.
2. Placer vægten og transportkassen uden for arenaen for at gøre kaninerne fortrolige med disse nye objekter, før måladfærden "vejning" og "transportboks" trænes.
3. For måladfærd (se trin 6-9) skal du føre kaninen ind i træningsarenaen som beskrevet i trin 5.7.
4. Sid på gulvet eller brug en lav skammel/trin til at sidde på i træningsarenaen.
5. Træn måladfærden efter hinanden i den rækkefølge, der er beskrevet i protokollen og ikke samtidigt. Gør en undtagelse, hvis et dyr ikke lærer et trin i en måladfærd på to på hinanden følgende dage - i dette tilfælde skal du træne den næste måladfærd samtidigt. Ændre rækkefølgen af måladfærd, hvis dette letter træningsprocessen for en person.
6. Efter tilvænning og klikintroduktion skal du begynde at træne alle dyr på 1^. trin i måladfærden "efter målet" (dvs. bolden i slutningen af målpinden er defineret som mål). Bemærk, at afhængigt af deres individuelle præstationer kan de nå forskellige træningstrin på denne dag. Fortsæt træningen i henhold til dyrenes individuelle fremskridt i de følgende dage.
7. Planlæg et træningspas (f.eks. ca. 30 minutter for en gruppe med seks til syv dyr) for hver arbejdsdag i løbet af ugen.
   BEMÆRK: Træningspasset starter, når træneren er i dyrerummet/stien og er klar til at starte træningen. Et træningspas slutter, når enten ingen af kaninerne deltager i træningen (længere), eller når alle kaniner har nået det sidste træningstrin i måladfærden, der skal trænes i denne session. Start hvert træningspas med det sidste vellykkede trin i protokollen. En session består af mindst et eller flere forsøg pr. dyr.
8. Start et forsøg ved at bede dyret om at udføre et bestemt træningstrin (dvs. trin 3.1, efter at kaninen har lært at røre målet med næse/mund) og afslutte forsøget, når dyret ikke deltager i træningen (længere), eller dyret nåede det sidste træningstrin i den måladfærd, der skal trænes. I slutningen af træningen skal du åbne træningsarenaen og lede kaninen ud af arenaen; Hold derefter målpinden (med målet vendt mod loftet) samt belønningsskålen foran brystet.
9. Planlæg træningen før fodring, rengøring, behandlinger eller eksperimentelle procedurer.
10. Brug en belønningsskål med en integreret klikker (figur 3, supplerende kodningsfil 1) og, for nogle måladfærd, en ekstra målpind.
11. Fyld belønningsskålen med velsmagende mad, f.eks. solsikkefrø og kornbaserede fodergodbidder.
    BEMÆRK: Kaniner er bladædere, og disse belønningseksempler er ikke optimale; På grund af hygiejnerestriktionerne i laboratoriedyrefaciliteten var de imidlertid de bedste tilgængelige alternativer til disse dyr. Hvis det er muligt, bør friske urter foretrækkes som en fødevarebelønning. Bemærk, at en belønning kun er en belønning, hvis kaninen virkelig favoriserer den.
12. Sørg for altid at holde belønningsskålen i samme position, f.eks. foran brystet, og begynd først at bevæge belønningsskålen mod kaninerne efter klikket. Bortset fra måladfærden "opdræt" og "hoppe på skødet", hold målpinden i den ene og belønningsskålen i den anden hånd.
13. Præsenter belønningen på det sted, hvor kaninens næse/mund var, da den ønskede adfærd blev vist korrekt.
14. Pas på, at kaninen kun spiser en lille mængde mad, når du præsenterer belønningen.
15. Hvis en kanin viser den ønskede adfærd mindst fire gange i en blok på fem forsøg (80% succesrate), fortsæt med næste trin. Hvis et dyr ikke er i stand til at udføre det næste trin (dvs. undlader at udføre trinnet mere end én gang), skal du vende tilbage til det forrige trin i protokollen. Hvis det var nødvendigt at vende tilbage til et tidligere trin, eller en kanin ikke deltager i træningen, skal du revidere træningsprotokollerne (f.eks. definere mindre træningstrin), vælge en anden (mere velsmagende) madbelønning eller kontrollere trænerens træningsfærdigheder.
16. Hvis en kanin korrekt udfører det sidste træningstrin i en måladfærd, skal du afslutte træningssessionerne for denne kanin samme dag.
17. Udskriv dokumentationsarket (supplerende fil 1), de detaljerede træningsprotokoller samt de forenklede træningsprotokoller (supplerende fil 2), og vedhæft dem til et udklipsholder, eller åbn dem på en tablet. Brug dokumentationsarket til at notere de træningstrin, som de enkelte dyr har nået i hver session.

3. Kontekstuel konditionering/tilvænning

BEMÆRK: De kontekstuelle konditionerings-/tilvænningssessioner udføres dagligt af træneren og dyrepasserne i ca. 15 minutter pr. kaningruppe over en periode på fem på hinanden følgende dage (mandag til fredag).

1. Tal blødt med kaninerne.
2. Tilbyd velsmagende madbelønninger.
   BEMÆRK: Vær opmærksom på, at pludselige ændringer i kosten kan forårsage fordøjelsesproblemer hos kaniner. Indfør derfor langsomt den nye madbelønning.
3. Flyt belønningsskålen fyldt med velsmagende mad mod kaninerne og lad dem spise af den.
4. Rør forsigtigt kaninerne rundt om nakke, skuldre, ryg og rumpe uden at begrænse dem.

4. Introduktion af klikkeren

BEMÆRK: Måladfærd: Gå hen til træneren og spis belønningen fra skålen efter klikkenk. Målet er, at kaninen forbinder madbelønningen med klikket, dvs. kaninen spiser madbelønningen efter klikket.

1. Lad kaninen nærme sig.
2. Klik én gang og flyt belønningsskålen mod kaninen (kaldet klik og behandl eller C og T).
3. Gentag trin 4.2 ti gange. Når du klikker for tiende gang, skal du vente et sekund, før belønningen præsenteres, og observere kaninens adfærd.
   BEMÆRK: Hvis dyret søger belønningen umiddelbart efter klikket, kan det antages, at konditioneringen af den sekundære forstærker var vellykket.
4. Gentag trin 4.1.-4.3. den følgende dag, hvis en kanin ikke spiste madbelønningen efter klikket mindst otte gange.

5. Opfyldelse af målet

BEMÆRK: Måladfærd: Følg og rør ved målet med næse/mund. Måladfærden i afsnit 6-9 er ændringer af den måladfærd, der præsenteres i afsnit 5.

1. Placer målet tæt på kaninens næse/mund.
   BEMÆRK: Bolden for enden af målpinden er defineret som mål.
   1. C og T, når kaninen rører målet med næse/mund.
      BEMÆRK: Sørg for, at kaninens næse/mund ikke rører pinden på andre udefinerede steder end bolden.
   2. Fjern målet fra kaninens synsfelt, mens du belønner.
   3. Gentag alle ovenstående trin i fem gange, indtil kaninen med succes udførte dette trin i mindst fire ud af fem gange (succesrate på 80%).
2. Placer målet et andet sted, hvor det kan berøres med næse / mund ved hovedbevægelser uden at bevæge hele kroppen.
   1. C og T, når kaninen rører målet med næse/mund, og følg trin 5.1.2 og 5.1.3.
3. Placer målet i en bredere afstand fra kaninen og lad kaninen strække sig mod den.
   1. C og T, når kaninen rører målet med næse/mund, og følg trin 5.1.2 og 5.1.3.
4. Yderligere øge afstanden mellem målet og kaninen, hvilket kræver, at dyret laver et hop for at nå målet.
   1. C og T, når kaninen rører målet med næse/mund, og følg trin 5.1.2 og 5.1.3.
5. Placer målet lige foran kaninens næse/mund, så kaninen kan røre målet og derefter langsomt flytte målet væk fra kaninen. Sørg for, at kaninen skal lave variabelt antal humle for at følge målet.
   BEMÆRK: I en blok på fem forsøg, 1^., 2^., 3^., 4. og 5^{. gang,} belønnes kaninen efter henholdsvis 2, 1, 2, 3 og 2 humle (i gennemsnit: efter 2 humle).
   1. C og T, når kaninerne har fremstillet det krævede antal humle, og følger trin 5.1.2 og 5.1.3.
6. Gentag trin 5.5, og flyt målet gennem korridoren mellem de to objekter.
   BEMÆRK: I dette trin placeres to objekter såsom tunneler parallelt med hinanden og danner en korridor.
   1. C og T, når kaninerne har fremstillet det krævede antal humle, og følg trin 5.1.2 og 5.1.3.
7. Gentag trin 5.5 og flyt målet mod træningsarenaen, så kaninen kommer ind i den.
   1. C og T, når kaninerne har fremstillet det krævede antal humle, og følg trin 5.1.2 og 5.1.3.

6. Vejning

BEMÆRK: Måladfærd: Bliv på vægten i mindst ét sekund. Hvis overfladen af skalaen er for glat, kan en skridsikker pude sættes på toppen. Men nogle kaniner har tendens til at gnave puden.

1. Før kaninen med målpinden mod skalaen som beskrevet i trin 5.5.
   1. C og T, når kaninen rører målet med næse/mund.
   2. Fjern målet fra kaninens synsfelt, mens du belønner.
   3. Gentag alle de ovenfor beskrevne trin fem gange, indtil kaninen med succes udførte dette trin i mindst fire ud af fem gange (succesrate på 80%).
2. Flyt målet lidt over skalaen, så kaninen træder på det med forpoterne for at røre målet med næse / mund.
   1. C og T, og følg trin 6.1.2 og 6.1.3.
3. Flyt målet lidt ud over midten af skalaen, så kaninen træder på det med forpoterne og strækker sig over skalaen for at røre målet med næse / mund.
   1. C og T, og følg trin 6.1.2 og 6.1.3.
4. Flyt målet længere ud over midten af skalaen, så kaninen træder på skalaen med for- og bagpoterne for at røre målet med næse / mund.
   1. C og T, og følg trin 6.1.2 og 6.1.3.
5. Før kaninen op på vægten som beskrevet i punkt 4.4. og vent et par sekunder før C og T.
   BEMÆRK: I dette trin skal du belønne kaninen efter at have siddet i en variabel tid på skalaen. I en blok på fem forsøg, 1^{., 2., 3., 4}. og 5^. gang, belønnes kaninen efter henholdsvis 0,5, 1,0, 2,0, 0,5 og 1,0 sekunder (i gennemsnit: 1,2 s). Mens kaninen forbliver stille i løbet af denne tid, kan vægten aflæses fra skalaen. Hvis vægten tager længere tid at stabilisere og måle vægten, skal du øge dyrets siddetid på vægten.
   1. C og T, og følg trin 6.1.2 og 6.1.3.

7. Indtastning af transportboks

BEMÆRK: Måladfærd: Ind- og udstigning af transportboksen. Til træningspasset skal du bruge en transportkasse (gulv 30 cm × 50 cm; dør 27 cm × 25,5 cm) med en åbning i låget (16 cm × 39 cm), hvis bund er dækket af snavset sengetøjsmateriale.

1. Før kaninen med målpinden mod kassen som beskrevet i trin 5.5.
   1. C og T, når kaninen er foran kassens indgang.
   2. Fjern målet fra kaninens synsfelt, mens du belønner.
   3. Gentag alle de ovenfor beskrevne trin fem gange, indtil kaninen med succes udfører opgaven i mindst fire ud af fem gange (succesrate på 80%).
2. Hold målpinden gennem lågåbningen og flyt den ind i kassen og derved motivere kaninen til at komme ind i kassen med forpoterne.
   1. C og T, og følg trin 7.1.2 og 7.1.3.
3. Følg trin 7.2 og før kaninen ind i kassen (dvs. alle for- og bagpoter kom ind i kassen).
   1. C og T, og følg trin 7.1.2 og 7.1.3.
4. Følg trin 7.3, og luk døren til kassen i et par sekunder. Åbn derefter døren igen.
   1. C og T, og følg trin 7.1.2 og 7.1.3.
5. Følg trin 7.3, og luk døren til kassen. Løft forsigtigt kassen lidt (dvs. et par centimeter over gulvet). Sæt kassen tilbage på gulvet, og åbn døren.
   1. C og T, og følg trin 7.1.2 og 7.1.3.
6. Følg trin 7.5. Før derefter kaninen med målpinden ud af kassen.
   1. C og T, og følg trin 7.1.2 og 7.1.3.

8. Opdræt

BEMÆRK: Måladfærd: Placer de forreste poter på håndfladen, mens du opdrætter. Til træningen skal du holde både målpind og belønningsskål i samme hånd.

1. Placer målet over kaninens hoved, så kaninen strækker næsen opad for at røre målet med næse / mund, mens alle poter forbliver på jorden.
   1. C og T.
   2. Fjern målet fra kaninens synsfelt, mens du belønner.
   3. Gentag alle de ovenfor beskrevne trin fem gange, indtil kaninen med succes udførte dette trin i mindst fire ud af fem gange (succesrate på 80%).
2. Placer målet over kaninens hoved som beskrevet i trin 8.1. Når kaninen har strakt næsen opad, skal du flytte målet længere opad, så kaninen løfter forpoterne fra jorden og rører målet med næse / mund.
   1. C og T, og følg trin 8.1.2 og 8.1.3.
      BEMÆRK: Hvis kaninen ikke udfører 8.2, kan der tilføjes et midlertidigt trin efter 8.2. For dette skal du følge 8.2 og derefter nærme dig og røre kaninens forpote (palmaroverflade) med håndfladen. C og T, og følg trin 8.1.2 og 8.1.3.
3. Placer den frie håndflade foran kaninen og flyt målet over kaninens hoved, så kaninen lægger forpoterne på hånden for at røre målet med næse/mund.
   1. C og T efter et sekund, og følg trin 8.1.2 og 8.1.3.
      BEMÆRK: Mens de forreste poter hviler på trænerens hånd, kan kaninens underliv inspiceres visuelt.

9. Hoppe på skødet

BEMÆRK: Måladfærd: Hop op på trænerens skød og bliv siddende, mens du bliver rørt. I trin 9.5-9.9 skal du holde både målpinden og belønningsskålen i samme hånd, da den ene hånd skal røre kaninen.

1. Før kaninen med målpinden nær træneren som beskrevet i protokoltrin 5.5.
   1. C og T, når kaninen rører målet med næse/mund.
   2. Fjern målet fra kaninens synsfelt, mens du belønner.
   3. Gentag alle de ovenfor beskrevne trin fem gange, indtil kaninen med succes udførte dette trin i mindst fire ud af fem gange (succesrate på 80%).
2. Flyt målet over trænerens ben, så kaninen sætter forpoterne på benene for at røre målet med næse / mund.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
3. Flyt målet over benene og lidt længere væk fra kaninen, så kaninen sætter forpoterne på benene og strækker sig fremad for at røre målet med næse/mund.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
      BEMÆRK: Hvis kaninen ikke udfører 9.4, kan der tilføjes et midlertidigt trin efter 9.3. For dette skal du følge trin 9.3 og derefter lokke kaninen med belønningsskålen på skødet. Når kaninen placerede alle fire poter på skødet, C og T og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
4. Flyt målet over benene og endnu længere væk fra kaninen, så kaninen hopper op på skødet for at røre målet med næse/mund.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
5. Følg trin 9.4. og strøg forsigtigt kaninen med den frie hånd fra kranial til kaudal (startende ved skulderen), mens kaninen sidder på skødet.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
6. Følg trin 9.4 og strøg forsigtigt kaninens ører med den frie hånd fra kranial til kaudal, mens kaninen sidder på skødet.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
7. Følg trin 9.4. og tag forsigtigt fat i et af kaninens ører for visuelt at inspicere ørerne.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
8. Følg trin 9.4. og stryg en for- eller bagpote med den frie hånd, mens kaninen sidder på skødet.
   BEMÆRK: Hvis højre kropsside af kaninen vender mod og venstre kropsside væk fra træneren, kan venstre pote forsigtigt røres (og omvendt). Sørg for at træne begge sider skiftevis.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.
9. Følg trin 9.4. og løft forsigtigt en forpote eller bagpote med den frie hånd, mens kaninen sidder på skødet.
   OBS: Klørne kan besigtiges, når poterne løftes. Sørg for at træne begge sider skiftevis.
   1. C og T, og følg trin 9.1.2 og 9.1.3.

Representative Results

I de følgende afsnit gives oplysninger om materiale og metoder, der går ud over protokollen, sammen med de repræsentative resultater.

Statistik

Data opnået fra ovennævnte protokol blev gemt i regneark og analyseret ved hjælp af software til avanceret statistisk analyse (materialetabel). Der blev udført test for normalitet (visuel inspektion af histogrammer og qq-plots, sammenligning af middelværdi, standardafvigelse og median) for de kontinuerlige parametre. Forskelle mellem parametre undersøgt i den frivillige tilgangstest (tidsvarighed, interaktion med træner og ukendt person, berøring af forpoteben) blev analyseret ved hjælp af Wilcoxon-signeret rangtest. Forskelle mellem håndteringsteknikkerne blev enten analyseret ved hjælp af Wilcoxon signeret rangtest eller McNemar-test (hvis binær). Forskellene blev anset for signifikante ved p < 0,05. Ved brug af Wilcoxon signeret rangtest skulle fordelingen af forskelle være symmetrisk i henhold til visuel inspektion af histogrammet.

Undersøgelsen var eksplorativ. Effektanalyse baseret på den varighed, kaninerne interagerede med "håndteringsenhederne", blev udført efter undersøgelsen (Wilcoxon signeret rangtest; effekt ≥ 0,999) ved hjælp af G * Power (version 3.1.9.7)⁵².

Tilvænning

Alle kaniner undtagen #4 og #10 indtog mad fra belønningsskålen og lod træneren røre ved dem i alle tilvænningssessioner. Kanin #4 accepterede ikke madbelønningen i 1^. session, men spiste fire gange fra belønningsskålen i 2^. session. Mængden af belønningsindtag steg dog i senere sessioner, og kaninen kunne også røres. Kanin #10 krævede også mere tid til at vænne sig til træneren og madbelønningen. I den første session accepterede kaninen madbelønningen fra træneren efter 5 minutter, men kunne ikke røres. I 2. session blev interessen for maden ikke observeret. I de efterfølgende sessioner accepterede kanin #10 dog både madbelønninger og berøringer.

Introduktion til klikkeren

Tolv ud af tretten kaniner gennemførte med succes protokolafsnit 4 på en dag og forbandt foderbelønningen (primær forstærker) med klikket (sekundær forstærker) inden for denne træningssession. Foreningen blev testet ved at observere kaninernes adfærd, efter at klikket blev præsenteret for tiende gang. Når et dyr søgte belønningen umiddelbart efter klikket, blev det antaget, at kaninen forbandt den primære med den sekundære forstærker. Kanin #4 spiste ikke madbelønningen efter klikket på dag 1. Det tog kanin #4 en dag længere (dvs. to dage) at forbinde klikket og madbelønningen.

Efter målet

Tabel 1 viser antallet af træningssessioner (angivet som median, 25^. percentil og 75^. percentil), der kræves for at lære kaninerne protokollernes måladfærd. Det tog kaninerne 2 træningspas (median) at følge målpinden ind i træningsarenaen (tabel 1). Alle kaniner nåede det sidste trin (5,7) af denne måladfærd.

Kanin #4 og kanin #7 havde brug for henholdsvis 7 og 8 træningspas, før de fulgte målpinden ind i træningsarenaen. Da kanin #7 ikke kunne gennemføre trin 5.4 og ikke gjorde et hop for at følge målpinden, blev et yderligere træningstrin (5.3+) implementeret i protokollen efter trin 5.3. I trin 5.3+ blev målpinden placeret i en større afstand fra kaninen end i 5.3, og kaninen måtte strække sig mod den i forskellige retninger, men målpinden kunne stadig nås uden at hoppe. Kanin #4 havde problemer med trin 5.5 og kunne ikke følge målpinden, der var placeret lige foran næse/mund, for et variabelt antal humle. Derfor blev der tilføjet et ekstra trin 5.4+ til protokollen. I dette tilfælde blev målpinden placeret lige foran kaninens næse/mund og blev derefter flyttet i forskellige retninger, hvilket krævede, at kaninen lavede et hop. Det samme ekstra trin blev også med succes brugt til kanin #7. Efter at have gennemført de ekstra træningstrin med en succesrate på mindst 80%, var de i stand til at fortsætte med følgende trin.

Vejning

Kaninerne havde brug for 1 træningssession (median), indtil de udførte trin 6.5 (dvs. at forblive på skalaen i et variabelt tidsrum) (tabel 1). Alle kaniner nåede det sidste trin (6,5) af denne måladfærd.

Indtastning af transportboks

Kaninerne udførte med succes alle trin fra 7,1 til 7,6 (dvs. ind og ud af transportkassen efter løft) inden for 2 træningssessioner (median) (tabel 1). Alle kaniner nåede det sidste trin (7,6) af denne måladfærd.

Da kaniner #2 og #3 med succes udførte trin 7.6 for første gang, ønskede de ikke at komme ind i transportboksen igen for at gentage dette trin. Derfor blev trin 7.5+ oprettet: efter at dyret fulgte målpinden mod kassen, blev belønningsskålen holdt gennem lågåbningen, og dyret blev lokket inde i kassen. Når kaninen kom ind i kassen, blev døren lukket, og kassen løftes forsigtigt. Efter at have lagt kassen tilbage på gulvet, blev døren åbnet, og kaninen blev ført med målpinden ud af kassen. Begge dyr lykkedes at udføre trin 7.5+ i mindst 4 gange, efterfulgt af trin 7.6 den næste dag.

Opdræt

1 træningssession (median) var påkrævet, indtil kaninerne med succes gennemførte trin 8.3 (dvs. placerede de forreste poter på trænerens hånd) (tabel 1). Da 11 ud af 13 kaniner (dvs. alle undtagen #3 og #7) ikke udførte trin 8.3, blev der defineret et yderligere træningstrin 8.2+ efter 8.2 for disse dyr. I trin 8.2+ blev målpinden flyttet over kaninens hoved, så kaninen løftede de forreste poter fra jorden og rørte målet med næse/mund. Mens kaninen rørte målet, nærmede træneren sig og rørte ved de forreste poter (palmaroverfladen) med håndfladen. Efter trin 8.2+ blev udført med succes i mindst fire ud af fem forsøg, blev trin 8.3 trænet igen og afsluttet.

Hoppe på skødet

2,5 træningssessioner (median) var nødvendige for at træne kaninerne i trin 9.1. til 9.9. (Tabel 1). Ti kaniner var i stand til at nå det sidste trin 9,9 (dvs. acceptere deres poter at blive rørt, mens de sad på trænerens skød). Kanin #4 nåede kun trin 9.2 (dvs. placerede sine forpoter på trænerens ben) og kanin #10 nåede trin 9.3 (dvs. hoppede på trænerens skød). Kanin #7 nåede trin 9.3+, hvilket var et ekstra midlertidigt trin efter trin 9.3. I dette tilfælde placerede kaninen de forreste poter på trænerens ben, som beskrevet i trin 9.2, og blev derefter lokket med belønningsskålen på trænerens skød. Når alle fire poter var placeret på trænerens skød, blev klik og belønning præsenteret. Dette trin blev med succes tilføjet til protokollen for otte kaniner for at lette udførelsen af følgende trin.

Generalisering

For at vurdere, om kaninerne generaliserede de trænede ledetråde til at udføre måladfærden med andre personer end træneren, bad en kvindelig dyrepasser, der var kendt af kaninerne, men kun havde lidt tidligere erfaring med klikkertræning, kaninerne om at udføre den trænede måladfærd "vejning", "indtastning af transportboks", "opdræt" og "hoppe på skødet". Hvis en kanin ikke tidligere lærte det sidste trin med at "hoppe på skødet", skal det sidste vellykkede træningstrin demonstreres.

Sessionerne fandt sted fem på hinanden følgende dage efter afslutningen af 3-ugers træningen (figur 1). Dyrepasseren læste træningsprotokollerne inden 1^. session. I begyndelsen af 1^. session gav træneren en kort demonstration af alle måladfærd. Derefter blev hun i folden, gav instruktioner under sessioner og dokumenterede, hvilket trin i måladfærden kaninerne viste. Hvis en kanin ikke viste et bestemt trin, blev dyrepasseren instrueret om at vende tilbage til det foregående trin i protokollen.

Alle kaniner undtagen kanin #4 udførte måladfærdene "vejning", "indtastning af transportboks" og "opdræt" (data angivet som median) efter henholdsvis 1 session, 2 sessioner og 2 sessioner (tabel 2). Kanin #4 var ikke villig til at vise nogen trin i disse måladfærd.

Otte ud af ti dyr, der var i stand til at vise det sidste trin med at "hoppe på skødet" (9,9), demonstrerede denne adfærd efter 3 sessioner (median). Selvom kanin #3 og #11 tidligere havde lært det sidste trin med at "hoppe på skødet" (9,9), viste de kun trin 9,3 med dyrepasseren. Kanin #4, #7 og #10 viste samme trin som med træneren (9,2, 9,3+ og 9,3).

Udførelse af måladfærd efter 1 uges træningspauser

For at teste, om dyrene kunne beholde de sidste trin med "vejning", "indtastning af transportboks", "opdræt" og "hoppe på skødet", hentede træneren måladfærden en uge og to uger efter generaliseringssessionerne (figur 1). Under disse pauser blev dyrene ikke trænet og modtog ingen belønninger.

På begge tidspunkter var alle kaniner i stand til at udføre de sidste trin med "vejning" (6,5), "indtastning af transportkasse" (7,6) og "opdræt" (8,3), de lærte i den foregående 3-ugers træning. Dyr (n = 10), der lærte det sidste trin med at "hoppe på skødet" (9,9), viste denne adfærd på begge tidspunkter; De, der ikke lærte det sidste trin i denne måladfærd (n = 3), var i stand til at demonstrere det sidste trin, de tidligere nåede (Kanin #4: Trin 9.2; Kanin #7: Trin 9.3+, Kanin #10: Trin 9.3) efter den første 1-ugers pause. Efter den anden 1-ugers pause viste disse tre kaniner de samme trin som ugen før, men blev også bedt om at udføre de næste trin og nåede trin 9.9.

Udførelse af måladfærd efter en træningspause på ca. 8,5 uger

Efter at dyrene havde haft en træningspause på ca. 7,5 uger (#1-5, #13) eller 9,5 uger (#6-12), blev måladfærden tilbagekaldt igen. Alle dyr var i stand til at vise det sidste trin med "vejning" (6.5), "indtastning af transportkasse" (7.6) og "opdræt" (8.3). Tolv kaniner viste det sidste trin med at "hoppe på skødet" (9,9), mens kanin #7 kun placerede sine forpoter på trænerens ben og strakte sig fremad for at røre målet med næsen/munden (9,3).

Frivillig tilgang til den velkendte træner og en ukendt person

Tre uger efter træningen blev kaninernes frivillige tilgangsadfærd testet for at undersøge deres interaktion med den velkendte træner og en ukendt person (begge kvindelige). Før testen badede begge personer med den samme shower gel og shampoo, tog den samme slags tøj og beskyttelsesudstyr på (handsker, masker, hårnet). Der blev udført to 5-minutters forsøg med 2 minutters pause mellem forsøgene i dyrestien. Som vist i figur 4A sad den velkendte træner og en ukendt person (i samme position) modsat hinanden på gulvet i pennen med bagsiden mod pennens væg. To huse blev fjernet fra pennen; Det resterende hus og tunnelen blev placeret nær de to andre vægge i samme afstand fra begge personer. I 2^. forsøg byttede de deres sædeplaceringer for at overveje kaninernes potentielle stedpræferencer. De hverken bevægede sig eller talte under de 5 minutters forsøg. Hvis en kanin tyggede på bukserne og klemte benet, blev en hånd forsigtigt flyttet mod kaninen for at få hende til at stoppe. Det skal bemærkes, at observationerne af de enkelte dyr blev foretaget inden for gruppen, dvs. kaninerne kunne interagere med hinanden under begge forsøg.

Videoerne blev analyseret retrospektivt ved hjælp af BORIS⁵³. Ifølge ethogrammet, der er defineret for denne undersøgelse, interagerede en kanin med en person, da alle fire poter var i kvadratet på 70 cm × 70 cm omkring en person eller på grænsen til denne firkant. Desuden blev det overvåget, om en kanin placerede begge forpoter på benene eller hoppede op på skødet (hvor alle fire poter blev placeret på skødet).

Figur 4B viser varigheden af kaninernes interaktion med de to personer. Wilcoxon signeret rangtest afslørede, at interaktionstiden med træneren og den ukendte person signifikant varierede i 1^. forsøg (z = -2.040, p = 0.041, Pearson korrelationskoefficient r = 0.57), men ikke i 2^. forsøg (z = 0.245, p = 0.807, r = 0.07). I 1^. forsøg brugte kaninerne mere tid på at interagere med træneren.

Tre (#1, #5, #6) og fem (#1, #6, #7, #8, #12) kaniner placerede deres forpoter på trænerens ben i henholdsvis forsøg 1 og 2. Fem dyr sprang med alle fire poter op på trænerens skød (forsøg 1: #1, #3, #5, #6; forsøg 2: #9). Mens fire dyr (#1, #2, #8, #9) i 1^. forsøg og tre (#1, #4, #8) dyr i 2^. forsøg klatrede med deres forpoter på den ukendte persons ben, sprang ingen af dem med alle fire poter på hendes skød. Gennemsnittet af forskellene mellem antallet af "forpoteben-berøringer" var hverken signifikant forskellig mellem træneren og den ukendte person i forsøg 1 (z = -0,264, p = 0,792, r = 0,07) eller i forsøg 2 (z = -0,707, p = 480, r = 0,20).

Effekt af håndteringsteknikker på kaninernes adfærd over for "håndteringsanordningen"

For at undersøge, om de teknikker, der blev brugt til at løfte kaninerne fra gulvet, påvirkede deres adfærd, blev der udført en 2-minutters adfærdsobservation efter denne procedure inden for rammerne af den generelle undersøgelse på to på hinanden følgende dage (figur 1). Denne observation blev udført for syv dyr.

På dag 1 blev kaninerne afhentet med transportkassen. Til dette fulgte de målpinden ind i kassen, kassen blev lukket og bragt til eksamensbordet, som beskrevet i træningstrin 7.5. Her blev de forsigtigt løftet fra kassen til bordet, med begge hænder/arme placeret under/omkring dyrets krop. En sundhedsinspektion (herunder palpation af kroppen, visuel inspektion af ører, øjne, næsebor, fortænder, anogenital region) blev udført, og en fødevarebelønning blev tilbudt dem efterfølgende. Efter sundhedsinspektionen blev de forsigtigt guidet med hænderne ind i transportkassen. Målpinden blev ikke brugt på undersøgelsesbordet for at sikre, at trænerens hænder var frie til at sikre dyrene. Da kaninerne kom ind i transportkassen igen, og døren blev lukket, blev kassen overført til pennen, og døren blev åbnet. Kaninen blev lavet til at følge målpinden og forlade kassen, efterfulgt af præsentationen af madbelønningen, som beskrevet i træningstrin 7.6.

På dag 2 blev kaninerne samlet op ved hjælp af den konventionelle teknik, der rutinemæssigt blev brugt af dyrepasserne (dvs. de blev fastholdt af halsen med den ene hånd og kortvarigt løftet op på den anden arm med hovedet vendt mod armens skurk). Derefter blev de overført til undersøgelsesbordet, og der blev udført en sundhedsinspektion som beskrevet ovenfor. Efter sundhedsinspektionen blev de tilbudt en madbelønning fra belønningsskålen. Til sidst blev de igen fastholdt af halsen og kortvarigt løftet op på armen for at bringe dem tilbage til pennen. Efter at de blev løsladt, blev der tilbudt dem en madbelønning igen.

Efter at foderbelønningen blev tilbudt kaninerne i stien, sad træneren på gulvet i stien uden at interagere med kaninerne, og der blev optaget en 2-minutters video, som blev analyseret retrospektivt ved hjælp af BORIS⁵³. Det skal bemærkes, at observationerne af individuelle dyr blev foretaget inden for gruppen, fordi de skulle overvåges i deres velkendte miljø. Det betyder, at kaninerne kunne interagere med hinanden. Følgende parametre blev undersøgt og defineret: Tidsvarighed brugt på interaktion med træner eller transportboks (dvs. en kanin var i trænerens eller transportboksens interaktionszone, når næsen var mindre end en kropslængde væk fra træneren eller boksen); tidsvarighed brugt i transportkassen (dvs. denne begivenhed opstod, når dyret var i kassens interaktionszone; den startede, da kaninerne kom ind i kassen med alle fire poter og stoppede, når en eller flere poter blev placeret uden for kassen); varighed brugt på at spise (dvs. kaninen indtog halm, hø, pellets eller afføring; tygge trænerens tøj eller sko blev ikke betragtet som at spise); tidsvarighed brugt til at gemme sig (denne begivenhed startede, da kaninen kom ind i et hus eller en tunnel med alle fire poter; den stoppede, da kaninen forlod husly med en eller flere poter); hoppe på skødet (dvs. kaninen hoppede op på trænerens skød og placerede alle fire poter på den; denne begivenhed opstod, da dyret var i trænerens interaktionszone); placering af forpoter på ben (dvs. kaninen placerede begge forpoter på trænerens ben; denne begivenhed opstod, når dyret var i trænerens interaktionszone).

Adfærdsanalysen blev udført af træneren og en person, der var fuldt blind for den udførte procedure. Ifølge Landis og Koch⁵⁴ var interraterens pålidelighed mellem træneren og den blinde person beregnet ved hjælp af BORIS⁵³ (Cohens Kappa) betydelig til næsten perfekt. Til yderligere analyse blev data ekstraheret af den blindede observatør brugt.

Wilcoxon signeret rangtest afslørede, at den konventionelle håndteringsteknik signifikant reducerede den varighed, der bruges på at interagere med "håndteringsanordningen", dvs. summen af den tid, der bruges på at interagere med træneren og kassen efter afhentning (z = 2,366, p = 0,018, r = 0,89; Figur 5A). Håndteringsteknikken påvirkede ikke signifikant varigheden af interaktionen med træneren (z = 1,014, p = 0,310, r = 0,28; Figur 5B). I modsætning hertil øgede det at samle kaninerne op ved kassen den tid, de interagerede med kassen (z = 2.366, p = 0.018, r = 0,66; Figur 5C) og brugt i kassen (z = 2.201, p = 0.028, r = 0.61; Figur 5D) sammenlignet med den konventionelle håndteringsteknik. Desuden brugte dyrene mere tid på at gemme sig i internaterne, efter at de blev samlet op ved den konventionelle håndteringsteknik (z = -1.992, p = 0.046, r = 0.046; Figur 5F).

Håndteringsteknikken havde ingen signifikant effekt på den tid, dyrene spiste (z = 0,944, p = 0,345, r = 0,26; Figur 5E), antallet af kaniner, der placerede deres forpoter på trænerens ben (McNemar: p = 1.000) eller hoppede op på trænerens skød (McNemar: p = 0.500). Uafhængigt af håndteringsteknikken sprang kanin #9 op på trænerens skød og kanin #12 placerede sine forpoter på trænerens ben. Derudover sætter kaniner #8 og #11 deres forpoter på benene efter at være blevet samlet op af transportkassen.

Mens foderbelønningen, der blev tilbudt på undersøgelsesbordet, blev indtaget af alle kaniner efter den korte transport i kassen, accepterede kun en kanin (# 8) den efter den konventionelle håndteringsteknik. Denne forskel var signifikant (McNemar: p = 0,031). I stien blev foderbelønningen accepteret af seks kaniner (dvs. alle undtagen #7) efter at have forladt transportkassen og fire kaniner (#7, #9, #10 og #12) efter at være blevet frigivet fra armen (konventionel håndteringsteknik; McNemar: p = 0,625).

Figur 1: Tidsplan. Alle tilvænnings-, trænings- og generaliseringssessioner samt adfærdsmæssige observationer blev udført om morgenen før fodring og rengøring. I uge 1 (dvs. fire dage efter ankomsten) blev fem kontekstuelle konditionerings-/tilvænningssessioner (mandag til fredag; protokolafsnit 3) udført af dyrepasserne og den tilsvarende forfatter (alle hunner), efterfulgt af en 3-ugers træningsperiode i uge 2-4 (mandag til fredag; protokolafsnit 4-9). Træningssessioner blev udført af den tilsvarende forfatter, som er dyrlæge med speciale i laboratoriedyrvidenskab og erfaring med træning af kaniner, mus, kyllinger og heste. Derefter blev adfærdsmæssige observationer foretaget på to på hinanden følgende dage for at undersøge, om teknikken, der blev brugt til at løfte kaninerne fra gulvet, påvirkede deres adfærd. I uge 5 blev der gennemført fem generaliseringssessioner (mandag til fredag) for at evaluere, om kaninerne ville udføre den måladfærd, der blev lært med en anden person end træneren. I uge 6 og uge 7 (torsdage) samt i uge 14 (mandag/tirsdag) testede træneren i forbindelse med den ugentlige generelle sundhedskontrol, om kaninerne kunne fastholde og vise måladfærden. En frivillig tilgangstest med træneren og en ukendt person blev udført i uge 7 for at undersøge kaninernes adfærdsmæssige reaktioner på kendte versus ukendte mennesker. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figur 2: Træningsarena. Træningsarenaen (se materialeoversigten) blev oprettet få minutter før træningen begyndte. (A) For at lette transport og installation bestod arenaen af to stykker, der var forbundet med hinanden i pennen. (B) To rækker gennemsigtige plastpaneler skabte en arena på ca. 136 cm × 90 cm × 70 cm. Døren blev fastgjort til de andre paneler ved hjælp af kabelbindere, der gjorde det muligt at åbne og lukke den. Døren kan låses ved hjælp af et klip. Da træningsarenaens vægge var gennemsigtige, havde en kanin visuel, lugtende og akustisk kontakt med gruppemedlemmerne, når den kom ind i træningsarenaen. En lav skammel/trin som sæde for træneren og, afhængigt af den måladfærd, der skal trænes, kan en vægt eller en transportkasse placeres i arenaen. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figur 3: Belønningsskål med integreret klikker. Belønningsskålen blev 3D-printet ved hjælp af hvid polymælkesyre (PLA). Størrelse på firkantet skål: 8 cm × 8 cm × 3 cm; Størrelse på cylindrisk håndtag: 9,5 cm × 2,3 cm. En fingerklikker (se materialetabel) blev fastgjort til håndtaget. En 3D-printfil til belønningsskålen findes i Supplementary Coding File 1. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figur 4: Frivillig indflyvningstest. (A) I de to 5-minutters forsøg sad den velkendte træner og en ukendt kvindelig person overfor hinanden i stien med bagsiden mod pennens væg. Et hus og en tunnel blev placeret nær de to andre vægge i samme afstand fra begge personer. (B) Varigheden brugt på at interagere med en person blev analyseret for hver kanin. En kanin interagerede med en person, da alle fire poter var i kvadratet på 70 cm × 70 cm omkring en person eller på grænsen til denne firkant. Symbolerne angiver dataene for hvert enkelt dyr. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figur 5: Effekter af håndteringsteknikker på kaninernes adfærd. (A-F) Illustrationer af adfærdsdata indsamlet fra syv kaniner, efter at de blev håndteret enten af transportkassen eller af den konventionelle teknik (dvs. de blev fastholdt af halsen og løftet på armen). Da træner og transportboks blev betragtet som "håndteringsanordninger", (A) Dette panel viser summen af panel B og C. Symbolerne angiver dataene for hvert enkelt dyr. Klik her for at se en større version af denne figur.

Kanin	Antal træningspas, der er nødvendige for at træne måladfærden
	Efter målet	Vejning	Indtastning af transportboks	Opdræt	Hoppe på skødet
#1	1	1	2	2	2
#2	1	1	4	1	5
#3	2	1	3	1	4
#4	7	2	1	3	2 (trin 9.2)
#5	2	1	3	1	3
#6	2	1	2	1	1
#7	8	1	2	2	3 (trin 9.3+)
#8	2	1	2	1	1
#9	2	1	2	1	2
#10	2	2	3	3	5 (trin 9.3)
#11	2	1	2	2	4
#12	2	1	1	1	1
#13	2	3	1	2	4
Median (25.-75. percentil)	2	1	2	1	2.5
	(2–2)	(1–1.5)	(1.5–3)	(1–2)	(1–4)*

Tabel 1: Antal sessioner, der er nødvendige for at træne måladfærden. Hvis en kanin ikke lærte det sidste trin i en måladfærd, er det sidste træningstrin, der nås, angivet i parentes.

Definition af et træningspas: ca. 30 minutter pr. gruppe (6-7 dyr); Mandag til fredag over tre uger; starter, når træneren sidder i folden og er parat til at påbegynde træningen. slutter, når enten ingen af kaninerne deltager i træningen længere, eller alle kaniner nåede et sidste trin i en måladfærd; Et dyr kan udføre mere end et forsøg pr. Session.

* Kaniner #4, #7, #10 blev udelukket fra denne beregning, da de ikke nåede det sidste trin med at "hoppe på skødet".

Kanin	Antal træningspas, indtil det sidste trin i måladfærden var nået
	Vejning (5 træningstrin)	Indtastning af transportboks (6 træningstrin)	Opdræt (3 træningstrin)	Spring på skødet (9 træningstrin)
#1	1	3	1	1
#2	1	3	1	1
#3	1	3	1	F (9.3)
#4	F	F	F	3 (9.2)
#5	2	3	2	2
#6	1	1	3	3
#7	1	1	3	3 (9.3+)
#8	1	1	1	3
#9	1	1	1	3
#10	1	3	3	3 (9.3)
#11	1	1	3	F (9.3)
#12	1	1	3	3
#13	1	3	2	5
Median (25.-75. percentil)	1	2	2	3
	(1–1)	(1–3)	(1–3)	(1.25–3)
	(undtagen #4)	(undtagen #4)	(undtagen #4)	(undtagen #3, #4, #7, #10, #11)

Tabel 2: Generalisering. I fem sessioner (mandag til fredag) bad en dyrepasser, der var bekendt med kaninerne, kaninerne om at udføre de sidste trin (eller det sidste trin, der blev nået) af den trænede måladfærd. Hvis det sidste trin i en måladfærd ikke blev nået, er det sidst nåede træningstrin angivet i parentes. F (fiasko) blev indikeret, når et dyr ikke viste det sidste trin i en måladfærd, der tidligere var nået i træningen. Definition af en session: mandag til fredag over en uge; starter, når dyrepasseren og træneren sidder i stien; slutter, når enten ingen af kaninerne deltager (længere), eller alle kaniner viste det sidste trin (eller det sidste trin nået) af en ønsket måladfærd; Et dyr kan udføre mere end et forsøg pr. Session.

Supplerende kodningsfil 1: 3D-printfil "belønningsskål". Polymælkesyre (PLA) kan bruges til printet. Klik her for at downloade denne fil.

Supplerende fil 1: Dokumentationsskema for seks kaniner. Arket skal udskrives eller åbnes på en tablet for at dokumentere træningsforløbet for hver kanin. I hver træningssession skal det noteres, hvilke træningstrin de enkelte dyr har nået, eller om der var behov for tilpasninger af forsøgsprotokollen. Eventuelle særlige hændelser (f.eks. eksterne faktorer, nedsat helbredstilstand) skal også dokumenteres. Klik her for at downloade denne fil.

Supplerende fil 2: Forenklede træningsprotokoller. Tabellerne beskriver trinnene i protokolafsnit 3-9 på en forenklet måde. For yderligere detaljer skal protokoltrinnene i hovedmanuskriptet læses. Klik her for at downloade denne fil.

Discussion

Træningsprotokollerne blev udviklet til at forfine rutineprocedurer såsom håndtering, sundhedsinspektioner og vejning hos laboratoriekaniner. Deres gennemførlighed blev evalueret i denne eksplorative undersøgelse ved hjælp af tretten kvindelige New Zealand hvide kaniner. Træningsprotokollerne kunne pålideligt anvendes til at træne kaninerne med succes. De fleste kaniner var i stand til at lære den måladfærd, der er defineret i træningsprotokollerne inden for mindre end 3-ugers træningsperioden, huskede dem efter 1 uges træningspauser og generaliserede dem til en anden person end træneren. Det var nødvendigt at foretage få tilpasninger af protokollen for at imødekomme de enkelte dyrs behov. Hovedresultatet af denne undersøgelse var, at den raffinerede håndteringsteknik til opsamling af kaniner, som beskrevet i træningsprotokollerne, var mindre aversiv end den konventionelle håndteringsteknik. Interessant nok viste de uddannede kaniner deres udforskende adfærd ikke kun over for den velkendte træner, men også en ukendt person i en frivillig tilgangstest.

Betydning af målet

Målet tjente som grundlag for den nuværende træningsprotokol. Ved introduktionen af målet lærte dyrene, at deres adfærd påvirkede miljøet og genererede konsekvenser. Introduktion af målet bygger tillid mellem mennesket og dyret, som demonstreret af kanin #4, det tog 7 træningssessioner, før målpinden fulgte ind i træningsarenaen, men lærte følgende måladfærd hurtigt (dvs. inden for 1-3 træningssessioner). Denne kanin #4 syntes at få tillid til træneren under målintroduktionen, hvilket lettede træningen af de andre måladfærd. Denne kanin manglede dog stadig tillid til andre personer og var ikke villig til at vise de fleste af måladfærdene i generaliseringssessionerne.

Det skal bemærkes, at målet ikke blev defineret som endepunkt i nogle protokolafsnit. I stedet skulle dyrene for eksempel følge målet for et variabelt antal humle eller blive på vægten i et variabelt antal sekunder. Variabelt belønningsmønster blev valgt for at øge og fastholde kaninernes opmærksomhed og motivation i træningen.

Signaler

Efter at kaninerne havde udført trin 5.1 med succes, placerede træneren i alle efterfølgende træningspas målet i tæt afstand til kaninens næse for at signalere kaninen, at træningsforsøget startede. Hvis kaninen rørte målet med næse/mund, blev viljen til at deltage i træningen overvejet, og træningen begyndte.

De nuværende protokoller indeholdt ikke yderligere signaler, f.eks. blev skalaen, transportboksen eller hånden ikke betragtet som signaler. I stedet blev målet brugt til at føre dyret ind i træningsarenaen, op på vægten, ind i transportboksen, op i luften (opdræt) eller op på trænerens skød. Det betyder, at måladfærden "vejning", "indtastning af transportboks", "opdræt" og "hoppe på skødet" var ændringer af "at følge målet". Årsagen til dette var kravene til træningsprotokollen: den skulle være gennemførlig at blive udført af personalet i dyrefaciliteter, der måske ikke er eksperter i dyretræning, og let integreret i den daglige arbejdsrutine. Derfor skal protokollerne være effektive og nå måladfærden hurtigt.

Den hånd, der er placeret foran kaninen (trin 8.3), skalaen eller transportkassen, har dog også potentialet til at blive både et signal og et mål for poterne. Derfor kan det være muligt at definere yderligere trin, der går ud over de nuværende protokoller og ikke kræver brug af målpinden. For eksempel, så snart kaninen ser skalaen, signalerer skalaen kaninerne at hoppe på den med alle fire poter.

Tilpasning af protokollerne

Selvom det kan forventes, at fænotypen hos næsten genetisk identiske forsøgsdyr er meget ens, er der adfærdsmæssige "forskelle mellem individer, der er konsistente over tid og på tværs af situationer [og] omtales som personlighed"⁵⁵, f.eks. er nogle dyr ret generte og andre dristige⁵⁶. Det kan tage generte, mindre udforskende dyr længere tid at lære protokollens definerede måladfærd (f.eks. Kanin #4). Selv om standardtræningsprotokoller kan være egnede for flertallet, skal træningen tage hensyn til det enkelte dyrs behov og tilpasse sig dem, når det er nødvendigt²⁶. Der bør således defineres yderligere mindre midlertidige trin for de kaniner, der ikke lærer et træningstrin i protokollen. De yderligere midlertidige uddannelsestrin skal hjælpe dem med at gå videre til følgende trin. Især fordi træningsplaner udvikles i teorien og derefter testes i praksis, kan det blive tydeligt, at der kræves yderligere træningstrin for at træne en bestemt måladfærd.

Med hensyn til de nuværende træningsprotokoller måtte der tilføjes nogle midlertidige træningstrin for måladfærden "efter målet", "ind i transportboksen", "opdræt" og "hoppe på skødet", som beskrevet detaljeret i afsnittet om de repræsentative resultater, da de enkelte dyr ikke kunne fortsætte med det følgende træningstrin. Interessant nok var de foreløbige trin 8.2+ og 9.3+ påkrævet af de fleste kaniner, hvilket understregede deres betydning. Derfor blev disse trin tilføjet som en note til træningsprotokollerne.

Alternativt til det definerede trin 8.2+ kan træneren placere en hånd på gulvet med håndfladen opad og lade kaninen træde på hånden med en og til sidst begge forpoter. Desuden er det tænkeligt, at en kanin kræver yderligere midlertidige trin før trin 9.3+, f.eks. placerer kaninen først en bagpote og derefter begge bagpoter på trænerens skød. Hvis en kanin ikke accepterer at blive rørt i trin 9.5-9.9, kan varigheden af berøring af de forskellige kropsdele gradvist øges. Desuden kunne oprindeligt kun pege- og langfingrene bruges til at stryge dyrene med fjerlet tryk. Derefter kan antallet af fingre, der bruges til berøring, og trykket øges i flere trin.

Forfining af håndteringsteknikker

Det kan antages, at håndteringen er meget aversiv, især hos kaniner med et genert personlighedstræk. Kaniner er landbyttedyr, og hvis de løftes (dvs. tages op fra gulvet) eller fastholdes (dvs. holdes i armene på et menneske) til en sundhedsinspektion og forsøgsprocedure, vil det sandsynligvis forårsage angst og nød. En mulighed for at forfine håndteringsmetoder blev introduceret i træningsprotokollerne: I stedet for at fastholde kaninen ved halsen og løfte kaninen på den anden arm, kan kaninen føres med målpinden ind i kassen og bæres i kassen til undersøgelsesbordet, som tidligere foreslået^{50, 57}, hvor kaninen forsigtigt overføres fra kassen til bordet. Alternativt kan toppen af kassen fjernes, eller kaninen kan styres med målpinden ud af kassen.

De adfærdsmæssige observationer, der blev udført, efter at kaninerne blev samlet op ved hjælp af enten den konventionelle håndteringsteknik eller transportboksen, afslørede, at den konventionelle håndteringsteknik var forbundet med mere stress- og angstrelateret adfærd end den alternative teknik. Denne konklusion blev draget af det store antal dyr, der nægtede foderbelønningen på undersøgelsesbordet, og den øgede tid, der blev brugt på at gemme sig i internaterne, når den konventionelle håndteringsteknik blev anvendt. Interessant nok påvirkede håndteringsteknikken ikke tidspunktet for interaktion med træneren, hvilket indikerer, at håndteringsprocessen måske ikke har svækket forholdet mellem menneske og dyr. Udover træneren fungerede transportkassen imidlertid også som "håndteringsenhed" (dvs. håndteringsanordningen for den konventionelle teknik var træneren, håndteringsanordningerne for den alternative teknik var både træneren og transportkassen). Derfor blev tidspunktet for interaktion med transportboksen også analyseret. Selvom kaninerne lige var blevet hentet med transportkassen, brugte de mere tid på at interagere med kassen eller i kassen, end når de blev samlet op med den konventionelle teknik. Dette antydede, at transportkassen kunne være forbundet med en positiv påvirkning. Når man sammenlignede den varighed, der blev brugt på at interagere med begge "håndteringsanordninger" (dvs. summen af den tid, der blev brugt på at interagere med kassen og træneren), øgede bokshåndteringsteknikken den tidsvarighed, der interagerede med "håndteringsenhederne", dvs. denne teknik havde en klar positiv effekt på kaninernes adfærdsmæssige respons over for "håndteringsenhederne" i forventning om at blive håndteret. Lignende fund blev gjort i laboratoriemus, hvilket viste, at blide håndteringsteknikker og træning reducerede stress og angst: dyr, der blev samlet op ved hjælp af en tunnel eller de cupped hænder, brugte mere tid frivilligt på at interagere med "håndteringsenheden" og viste mindre angstrelateret adfærd end halehåndterede mus¹². Træning syntes at styrke denne effekt. Leidinger et al. demonstrerede, at blide håndterede (tunnel/kop) mus viste mindre vandladning, afføring og vokalisering, når de blev fastholdt af halsen og mindre flydende adfærd i Morris Water Maze Test, da de blev trænet ved hjælp af PRT sammenlignet med utrænede mus¹³.

Gennemførligheden af protokollerne for det daglige arbejde - træningsvarighed, fastholdelse og generalisering

Antallet af træningssessioner, der kræves for at lære en måladfærd, afhang af det enkelte dyr og måladfærden, som omfattede et andet antal trin, der spænder fra afsnit 3 til afsnit 9 i protokollen præsenteret ovenfor.

I henhold til antallet af dyr, der lykkedes med at lære en måladfærd og antallet af tilpasninger, der skulle foretages i protokollerne for de enkelte dyr, havde træningstrinnene forskellige sværhedsgrader. Adfærden "efter målet" var kaninernes første træningsoplevelse, og derfor tog det længere tid for nogle dyr at træne på denne adfærd end den anden måladfærd, som diskuteret ovenfor. Mens alle dyr kunne trænes i at "veje" i henhold til denne protokol, var der behov for yderligere midlertidige trin for at "komme ind i transportboksen" af to dyr og for at "opdrætte" såvel som "hoppe på skødet" af næsten alle kaniner. Dette kan forklares ved graden af fysisk kontakt mellem dyr og træner, som var nødvendig for at udføre de forskellige måladfærd. "Vejning" og "indtræden i transportkasse" indebar ingen fysisk kontakt mellem dyr og mennesker. Det sidste trin i "opdræt" (8.3) og trin 9.2-9.4 i "hoppe på skødet" krævede, at kaninerne fik fysisk kontakt med træneren. Derudover rørte træneren kaninens skulder, ryg, rumpe, ører eller poter i trin 9.5-9.9 for at "hoppe på skødet", hvilket øgede graden af fysisk kontakt mellem dyr og træner. At acceptere at blive rørt ved var mere udfordrende for nogle kaniner end for andre. Som diskuteret ovenfor var det gavnligt at tilpasse træningsprotokollerne for disse måladfærd og tilføje midlertidige trin.

Tre kaniner krævede dog yderligere træningspas for at fuldføre måladfærden "hoppe på skødet" (#4, #7, #10). Fysiske handicap, der forhindrede disse dyr i at hoppe op på trænerens skød, kunne udelukkes. Desuden var kaninerne i stand til at hoppe på deres huse, højderne af disse var højere end trænerens skød.

Det var bemærkelsesværdigt, at to af disse tre kaniner (#4 og #10) havde brug for længere tid til at vænne sig til træneren såvel som madbelønningen i tilvænningssessionerne og delvist havde brug for flere træningssessioner for at nå det sidste trin i anden måladfærd. Dette gjaldt også for kanin #7, som havde en skade i halen på grund af kampe i gruppen siden fjerde tilvænningssession. Derfor blev kanin #7 afhentet, overført til undersøgelsesbordet, behandlet og inspiceret dagligt i 15 dage, hvilket kan have resulteret i øget forsigtighed over for mennesker. På den ene side er det afgørende at bemærke, at træningspræstationen kan påvirkes af for eksempel en nedsat sundhedstilstand, øget stressniveau eller et forstyrret forhold mellem menneske og dyr på grund af andre indgreb. På den anden side viste disse observationer vigtigheden af tilvænning til træneren og madbelønningen. Nogle dyr kan kræve længere tid for at blive fortrolige med trænerens tilstedeværelse og acceptere madbelønningen fra træneren. Hvis der var blevet gennemført yderligere tilvænningssessioner, kunne kanin #4 og #10 have klaret sig bedre i træningssessionerne. Relevansen af habituating kaniner til mennesker er allerede blevet rapporteret i litteraturen. Den kommercielle opdrætter, hvorfra kaninerne i denne undersøgelse blev købt, introducerede for nylig regelmæssige petting sessioner, hvilket reducerede stressrelateret adfærd og eliminerede aggressioner⁵⁸. I en tidligere undersøgelse blev petting og håndtering af unge kaniner vist sig at mindske angstrelateret adfærd, øge deres vægtøgning og reducere dødeligheden⁵⁹.

Når kaninerne havde lært de forskellige måladfærd, var de stadig i stand til at vise dem efter to korte (en uge) og en lang (ca. 7,5-9,5 uger) træningspauser, bortset fra individuelle undtagelser. Disse observationer kan indikere, at det er tilstrækkeligt at bede kaninerne om at udføre den trænede måladfærd en gang om ugen, når den generelle undersøgelse udføres, og rummet/stien rengøres.

For protokollens gennemførlighed for det daglige arbejdsliv er det også afgørende, at kaninerne generaliserer den trænede måladfærd til andre personer end træneren. I tilfælde af ferie eller sygdom skal en anden person fortsætte træningen og pleje dyrene. De fleste kaniner (tolv ud af tretten) generaliserede måladfærdene "vejning", "indtastning af transportboks" og "opdræt" til dyrepasseren, selvom det i nogle tilfælde tog kaninerne mere end en træningssession for at vise den ønskede adfærd. "Vejning" syntes at generalisere bedst; efterfulgt af "indkørsel i transportboks" og "opdræt". Imidlertid syntes "hoppe på skødet" at være vanskeligere at generalisere til en anden person. Det tog dyrene længere tid at demonstrere den ønskede adfærd (9.9.), og to kaniner, der tidligere lærte det sidste trin 9.9, viste ikke denne måladfærd, muligvis på grund af den højere fysiske kontakt, der var nødvendig (se ovenfor). En kanin (# 4) viste ingen trin i måladfærden "vejning", "indtastning af transportkasse" og "opdræt" og var ikke interesseret i at interagere med dyrepasseren. Kanin #4 var et af de dyr, der havde brug for længere tid til at vænne sig til træneren og madbelønningen i tilvænningssessionerne. Dette kan indikere, at for nogle individer er yderligere sessioner, hvor dyrepasserne bruger tid sammen med kaninerne, vænner dem til at acceptere madbelønningen fra dem og opbygge et positivt bånd^{gavnlige 23}. Kaniner kan være i stand til at skelne mellem forskellige personer, som påvist for rotter⁶⁰. Yderligere faktorer, der potentielt kan påvirke kaninernes præstation i sessionerne med træneren og dyrepasseren, kan være ubevidste signaler, som træneren gav dyrene under træningssessionerne, f.eks. placeringen af målpinden eller belønningsskålen, kropspositionen eller bevægelsen. Hvis træneren ikke er opmærksom på disse signaler, vil de ikke blive dokumenteret, og de andre personer vil ikke efterligne disse signaler.

Desuden kan træningsfærdighederne hos de personer, der arbejder med dyrene, herunder rutinen med håndtering af målpinden og belønningspræsentationen, påvirke dyrenes adfærd. Udover viden om læringsprincipper og dyrekommunikation er praktiske erfaringer nødvendige for at kunne træne et dyr⁶¹ og hente en måladfærd. Da generaliseringssessioner, der involverede en faglært og en ufaglært person, ikke blev sammenlignet, kan relevansen af faktoren "træningsfærdigheder" ikke bestemmes. Så vidt forfatterne ved, er en stor del af forsøgsdyrepersonalet imidlertid ikke uddannet i dyretræning, og derfor repræsenterede de forhold, hvorunder generaliseringssessionerne blev udført (dvs. involverede en dyrepasser med kun få tidligere erfaringer med klikkertræning) en realistisk ramme i forsøgsdyrfaciliteter.

De repræsentative data i protokollerne giver dyrefaciliteter en idé om arbejdsbyrden forbundet med at træne de forskellige måladfærd. Dataene kan hjælpe dyrefaciliteter med at oprette deres egne arbejdsplaner, når de implementerer (dele af) protokollen. Afhængigt af det enkelte dyr og måladfærd bør der reserveres lidt ekstra tid til generaliseringsprocessen. Varigheden kan dog variere, når man arbejder med hankaniner eller en anden kaninavl. I dyrestaldene bør det diskuteres, om der er passende tid, og hvad der skal ændres for at give tid til dyretræning.

Ud over den tid, der kræves til træning af dyrene, skal det tages i betragtning, at uddannelse kræver dygtige trænere og undervisning af personalet i, hvordan man træner dyr, også kan være tidskrævende. Hvis uddannelse var en obligatorisk del af uddannelsen af forsøgsdyrspersonalet, dvs. dyrepassere, dyrlæger og forskere, ville gennemførelsen af dyretræning i faciliteter blive lettet og tage kortere tid. I henhold til bilag III til direktiv 2010/63/EU skal "virksomheder etablere tilvænnings- og træningsprogrammer, der er egnede til dyrene, procedurerne og projektets varighed", dvs. at dyretræning er lovpligtig. I Tyskland skal sådanne programmer indsendes ved ansøgning om dyreforsøgslicens. Dette kræver, at personer, der planlægger dyreforsøg og arbejder med forsøgsdyr, er uddannet i dyretræning. Men i det mindste i Tyskland er dyretræning ikke en del af uddannelsesplanen for dyrepassere inden for forskning og klinik 62,63,64. Desuden nævnes det ikke udtrykkeligt i EU's henstillinger om uddannelsesrammen⁶⁵. Så længe uddannelse ikke er implementeret i disse regler, kræver fortsat faglig udvikling med fokus på positiv forstærkningstræning derfor mere opmærksomhed. Forsøgsdyrepersonalet skal lære principperne for indlærings- og træningsteknikker, de nødvendige kriterier, overførsel af procedurer mellem undervisere, journalføring og hvordan man reagerer på dyr, der ikke deltager på den ønskede måde for at sikre konsistens og forudsigelighed.

Menneske-dyr-interaktion

Den intensive menneske-dyr-interaktionstid under træningssessionerne giver optimale rammer for at styrke relationen mellem de enkelte kaniner og træneren^26,66. Et positivt forhold mellem mennesker og dyr er gavnligt for dyrenes trivsel, da det kan reducere deres stressniveau i husdyrhold og forsøgsmiljøer⁶⁷. I de nuværende træningsprotokoller overvejer træneren kaninernes handlefrihed, og de kan beslutte at deltage (eller ikke deltage) i træningen på frivillig basis. At give dyrene handlefrihed er gavnligt for deres velbefindende ¹⁶ og bør derfor forfølges i forsøg såvel som opstaldning og opdræt. Der er forskellige adfærdsmæssige agenturniveauer⁶⁸; deltagelse i PRT kan tilskrives niveauet af handlingsdrevet agentur, dvs. "aktivt at opføre sig for at opnå aktuelle resultater [f.eks. indkøbe fødevarer]^"68.

Ved analyse af kaninernes frivillige tilgang til træneren og en ukendt person kunne der observeres en intensiv interaktion mellem mennesker og dyr. Resultaterne afslørede, at alle kaniner, undtagen et dyr i 1^. forsøg (#12), interagerede med både træneren og den ukendte person. De syntes at genkende træneren, da de viste en klar præference for at interagere med træneren i 1^. forsøg, og nogle af dem sprang med alle fire poter på trænerens skød; en adfærd, der ikke blev vist over for den ukendte person. Selvom kaninerne brugte mere tid på at interagere med træneren end den ukendte person i 1^{. forsøg,} adskilte interaktionstiden sig ikke længere i 2^{. forsøg.} En årsag til denne observation kan være, at kaninerne forventede at modtage en foderbelønning fra træneren i 1^. forsøg, og på grund af manglende foderbelønning i den frivillige tilgangstest brugte de ikke længere mere tid sammen med træneren i 2^{. forsøg.} Disse data understregede dog, at de uddannede kaniner hurtigt vænnede sig til tilstedeværelsen af en ukendt person, og ingen af dem var for genert til at interagere. I modsætning hertil var de meget udforskende og interesserede i den ukendte person. Men da en utrænet kontrolgruppe ikke blev undersøgt, er effekten af træning på kaninernes frivillige tilgangsadfærd uklar.

En hypotese, der forklarer kaninens adfærd #12 i 1^. forsøg, er, at denne person stadig skulle vænne sig til tilstedeværelsen af den ukendte person i 1^. forsøg og var mere interesseret i at interagere med både træneren (70 sekunder) og den ukendte person (9 sekunder) i 2^{. forsøg.} Kaniner har forskellige personlighedstræk, som kan påvirke komfortniveauet omkring ukendte personer og igen latenstiden til at nærme sig eller interaktionstidens varighed med en person ^69,70.

Begrænsninger

Vi er opmærksomme på, at alle kaniner i stien/rummet, ikke kun den, der deltager i træningen, kan høre klikket (dvs. den konditionerede forstærker) under et træningspas, og dens forstærkende virkning kan blive svækket, da foderbelønningen (dvs. naturlig/ubetinget forstærker) ikke præsenteres. Hvis en kanin uden for træningsarenaen viser en trænet adfærd og hører klikket, men der ikke præsenteres mad (og dette scenarie forekommer flere gange), kan den trænede adfærd slukkes. Dette fænomen kaldes udryddelse^64,71. Men da al måladfærd i de nuværende protokoller afhænger af det mål, som træneren præsenterer, er det usandsynligt, at udryddelse vil forekomme i vores træningsindstilling.

Da træningsarenaens vægge var gennemsigtige, og træningsarenaen var placeret i stien, kunne kaninerne se, høre og lugte hinanden under træningen, hvilket er en klar velfærdsrelateret fordel. Desuden kan kaninerne have observeret deres gruppemedlemmer under træningssessionerne og lært af hinanden. Hos rotter er det tidligere vist, at individer lærte at udføre en måladfærd ved at observere deres burkammerat blive trænet af PRT⁴⁵. Denne kendsgerning kan betragtes som både en fordel og ulempe. Dyrenes læringsfremskridt kan være hurtigere, når de kan observere hinanden. Dataene om de enkelte dyr kan dog påvirkes af gruppemedlemmernes præstationer og må ikke udelukkende tilskrives det enkelte dyrs træning. Således kan træning af dyr uden kontakt med deres gruppemedlemmer eller enkelthusede kaniner tage længere tid.

Adfærdsmæssige observationer af individerne (i den frivillige tilgangstest og efter anvendelse af de forskellige håndteringsteknikker) blev udført i deres velkendte sociale miljø og gruppe for at undgå stress og distraktion forårsaget af et nyt miljø og adskillelse fra deres gruppe, hvilket igen ville have påvirket adfærdsmæssige observationer. Ulempen er dog, at kaninerne kan have påvirket hinandens adfærd under observationssessionerne.

Virkningerne af håndteringsteknikkerne blev kun undersøgt på syv dyr, der involverede træneren som person, der håndterer dyrene. Forfatterne planlægger en opfølgende undersøgelse, herunder en a priori stikprøvestørrelsesberegning for at reproducere resultaterne med andre håndterere og yderligere undersøge forskellene mellem håndteringsteknikkerne.

Alle mennesker, der var involveret i træning, håndtering og den frivillige tilgangstest, var kvinder. Det blev ikke undersøgt, om kaninernes træningspræstation eller deres adfærd ville variere, hvis mandlige personer var involveret.

De nuværende træningsprotokoller skal give læseren en idé om, hvad der kan trænes hos kaniner, men omfatter ikke alle potentielle måladfærd, der ville være gavnlige at træne i en laboratoriekanin. For eksempel ville mærkning af en kanin som foreslået i protokolafsnittet om generelle krav også være værd at træne ved hjælp af PRT.

Som påpeget yderligere ovenfor er valget af den rigtige belønning ikke trivielt. På grund af hygiejnerestriktioner er brugen af friske urter som fødevarebelønning ikke tilladt i nogle laboratoriedyrfaciliteter, og derfor skal der anvendes mindre passende madbelønninger såsom solsikkefrø eller kornbaserede fodergodbidder. Med hensyn til beslutningen om belønning af foder er nogle regler og bestemmelser i den nuværende laboratoriepraksis skadelige for dyrenes velfærd og effektive træning og skal derfor muligvis tages op til fornyet overvejelse fra sag til sag. Det kan også være muligt at bruge alternativer til madbelønninger, f.eks. blide berøringer eller interaktioner med træneren eller berigelsesgenstande. Træneren skal dog sørge for hvert enkelt dyr, at alternativet er at belønne dyret, fordi en belønning kun er en belønning, hvis kaninen virkelig favoriserer det. Især berøringer modtages muligvis ikke som givende af alle kaniner.

Konklusioner

Sammenfattende var denne undersøgelse et første skridt til at udfylde videnshullet om passende træningsprotokoller for laboratoriekaniner. Kvindelige New Zealand hvide kaniner kunne trænes til rutinemæssige opdrætsprocedurer ved hjælp af PRT og generaliserede måladfærden lært til andre personer, selvom der bør reserveres ekstra tid til generaliseringsprocessen. Måladfærd uden fysisk kontakt syntes at være lettere at lære end adfærd, der krævede fysisk kontakt til mennesker. Efter at dyrene havde gennemført træningen af en måladfærd, var det tilstrækkeligt at hente dem en gang om ugen i forbindelse med den generelle undersøgelse og rengøring af stien. Træningsprotokoller, der anses for at være almindeligt anvendt på alle kaniner, er praktiske, men træneren skal være opmærksom på, at den i nogle tilfælde skal tilpasses dyrets behov. Resultaterne af håndteringsteknikker antydede, at det var mindre aversivt at samle kaninerne op med transportkassen i stedet for at fastholde dem ved halsen og løfte dem på armen. Alt i alt giver de nuværende protokoller gennemførlige instruktioner til tilvænnings- og træningsprocessen for kaniner og kan tjene som forfining i laboratoriedyrfaciliteter.

Dyr må ikke lide på grund af at spare arbejdskraft, tid eller penge (i det mindste i henhold til den tyske dyrevelfærdslov⁷²). Det er vigtigt at passe og håndtere alle dyr på den mest skånsomme måde. Da utrænede dyr i højere grad lider af angst og nød forårsaget af eksperimentelle og rutinemæssige opdrætsprocedurer end deres uddannede kolleger¹³, er træning en simpel forfiningsforanstaltning for effektivt at forhindre dem i at opleve negative affektive tilstande.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bed-r’Nest	The Andersons, Inc., Maumee, USA		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Finger Clicker	ASCO		https://ascoshop.de/products/fingerclicker
G*Power		version 3.1.9.7
Heu-Proppen	Ssniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
IBM Corp. Released 2020. IBM SPSS Statistics for Windows,  Armonk, NY: IBM Corp	IBM Corp	Version 27.0.	in the manuscript referred to as "software for advanced statistical analysis"
Kaninchen Haltung + 25 mg/kg Salinomycin-Natrium-Sondermischung	Ssniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Lignocel block	Lignocel J. Rettenmaier &Söhne GmbH + Co KG, Rosenberg, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Lillebro geschälte Sonnenblumenkerne”, Martina GmbH, München, Germany) and Rainbow Foraging Bits (Bio-Serv, Flemington, USA)	Martina GmbH, München, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Microsoft Excel for Microsoft 365 MSO	Microsoft Corporation	Version 2305	in the manuscript referred to as "spread sheet"
New Zealand White rabbits	Charles River Laboratories France
Plattformwaage DE 35K5DL	KERN & SOHN GmbH, Balingen-Frommern, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Premium scientific bedding (fine & flake)	SAFE, Augy, France		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Rainbow Foraging Bits	Bio-Serv, Flemington, USA		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Snackball für Kaninchen – 7 cm	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Target stick with integrated clicker	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Trixi Transportbox Capri Open Top	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.
Weiden-Heuball	JR FARM GmbH, Holzheim-Pessenburgheim, Germany		The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies.