Examen de la infección oral por Candida en pacientes con síndrome de Sjögren primario
Summary
En este trabajo se presenta un protocolo para el examen de la infección oral por Candida en pacientes con síndrome de Sjögren primario, que puede ser utilizado para el tratamiento oportuno y, posteriormente, evitar complicaciones relacionadas.
Abstract
El síndrome de Sjögren primario (ssp) es una enfermedad autoinmune caracterizada por síntomas como sequedad de boca, ojos secos y otros síntomas sistemáticos. Debido a la hiposalivación que experimentan los pacientes con SPp, a menudo se produce disbacteriosis oral. Una complicación común de la pSS es la infección oral por Candida . En este artículo, los autores describen métodos sistemáticos que pueden diagnosticar eficazmente la infección oral por Candida e identificar las cepas de Candida utilizando saliva, hisopos de la mucosa oral o enjuagues bucales de pacientes con pSS. El agar dextrosa de Sabouraud (SDA), el ensayo de formación de hifas, la prueba de frotis de hidróxido de potasio (KOH) y el ensayo de tinción con blanco de calcofluor (CFW) se utilizan para el diagnóstico de la infección oral por Candida . Se utiliza un agar diagnóstico de Candida para la identificación de cepas de Candida . Por último, las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos se utilizan para determinar el tratamiento farmacológico antifúngico adecuado. Este método estandarizado puede mejorar el diagnóstico, el tratamiento y la investigación futura de las infecciones orales por Candida relacionadas con pSS. El diagnóstico precoz, mediante este método, también puede prevenir las complicaciones que surjan debido a la demora en recibir el tratamiento adecuado.
Introduction
La candidiasis es causada por Candida spp., que son patógenos oportunistas. Las cepas comunes incluyen Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis y Candida dubliniensis1. Las infecciones oportunistas causadas por Candida spp. incluyen infecciones superficiales por Candida y candidiasis invasiva. La candidiasis invasiva ocurre principalmente en individuos inmunocomprometidos; por ejemplo, en pacientes con síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), la candidiasis invasiva puede amenazar significativamente la calidad de vida o incluso la esperanza de vida2. La infección superficial por Candida , como la candidiasis mucocutánea, es más frecuente en los pacientes3.
La candidiasis oral, una infección superficial por Candida , es la infección fúngica humana más común. Candida albicans es un comensal normal de la boca; se ha reportado que la tasa de portación de Candida spp. oscila entre el 20% y el 75% en la población general sin ningún síntoma4. El crecimiento excesivo de Candida puede provocar molestias locales en los pacientes, como alteración del gusto de la sensación, sensación de ardor en la boca, disfagia debido a una mala nutrición, retraso en la recuperación y estancia hospitalaria prolongada. La candidiasis oral a largo plazo puede conducir a una candidiasis invasiva grave, lo que resulta en una morbilidad y mortalidad significativas5. La candidiasis oral también puede aumentar el riesgo de cáncer oral5. El deterioro de la función de las glándulas salivales es uno de los factores de riesgo para la candidiasis oral6. El inicio de la infección es la adhesión de Candida a las paredes celulares epiteliales. A esto le sigue la proliferación y filamentación de Candida y la formación y maduración de biofilm7. Las biopelículas son extremadamente difíciles de erradicar y son resistentes al tratamiento antifúngico convencional, lo que hace que el tratamiento clínico sea un desafío para la infección oral por Candida asociada a la biopelícula7.
El síndrome primario de Sjögren (SPS) es una enfermedad autoinmune que se caracteriza por sequedad de boca, ojos secos y otros síntomas sistemáticos8. La sequedad bucal es el síntoma más frecuente del pSS. La saliva tiene importantes funciones fisiológicas antifúngicas. Por un lado, puede diluir y fregar la boca y, posteriormente, eliminar organismos de la mucosa. Por otro lado, la saliva contiene proteínas antimicrobianas, como la lactoferrina, la siaoperoxidasa, la lisozima, polipéptidos ricos en histidina y anticuerpos anticándidos específicos, que pueden interactuar con la mucosa oral y prevenir el crecimiento excesivo de Candida6. La reducción del flujo sanguíneo puede predisponer a los pacientes con pSS a la candidiasis oral. Un estudio observacional transversal realizado en 61 pacientes con pSS encontró que el 13,1% de los pacientes con pSS presentaron signos orales de candidiasis y se encontró una correlación significativa y negativa de la unidad formadora de colonias (UFC)/mL de Candida albicans con los niveles de saliva total no estimulada (UWS) y saliva completa estimulada (SWS)9.
Los métodos introducidos en este manuscrito pueden identificar la infección oral por Candida a partir de los atributos morfológicos caracterizados (por ejemplo, las hifas y las células de levadura) en frotis directo o después del cultivo10. La identificación de la cepa de Candida utilizando un agar diagnóstico de Candida se basa en la formación de colonias de diferentes colores con morfología variada, que resultan de la escisión de sustratos cromogénicos por enzimas específicas de la especie11. En este manuscrito, se introducen métodos sistemáticos para la detección de la infección oral por Candida , incluyendo el cultivo oral tradicional de Candida y el examen rápido mediante una prueba de frotis de hidróxido de potasio (KOH) y un ensayo de tinción con blanco de calcofluor (CFW)10. Además, se ha introducido la prueba de susceptibilidad a los antifúngicos, que puede guiar el tratamiento clínico de la infección oral por Candida . En situaciones reales, no es necesario realizar todos los métodos introducidos en este manuscrito; los métodos de detección oral de Candida se pueden seleccionar de acuerdo con el propósito. El examen de la infección oral por Candida y la determinación de cepas de Candida en pacientes con pSS no solo benefician el tratamiento de la enfermedad, sino que también ayudan a evaluar la caracterización de la candidiasis oral y los perfiles de especies.
Protocol
Representative Results
Discussion
En el presente manuscrito, proporcionamos una serie de métodos sistemáticos, simples y factibles para detectar infecciones orales por Candida , identificar cepas de Candida y probar la susceptibilidad antifúngica de los medicamentos de uso común en pacientes con pSS.
En la práctica, no todos los métodos introducidos en este manuscrito son necesarios. Los métodos de detección oral de Candida se pueden elegir en función del propósito específico. Las pruebas…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta investigación contó con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (82201084), la Fundación de Ciencias Postdoctorales de China (2022M722232), la Fundación de Investigación Postdoctoral de Beijing (2023-ZZ-020), el Proyecto Miaopu del Hospital Tiantan de Beijing, la Universidad Médica Capital (2023MP10) y el Fondo General de Investigación, el Consejo de Subvenciones de Investigación de Hong Kong (27111820 y 17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
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