Exame de Infecção Oral por Candida em Pacientes com Síndrome de Sjögren Primária
Summary
Aqui, apresentamos um protocolo para o exame da infecção oral por Candida em pacientes com síndrome de Sjögren primária, que pode ser usado para tratamento oportuno e, posteriormente, evitando complicações relacionadas.
Abstract
A síndrome de Sjögren primária (SSp) é uma doença autoimune caracterizada por sintomas como boca seca, olhos secos e outros sintomas sistemáticos. Devido à hipossalivação experimentada por pacientes com SSP, freqüentemente ocorre disbacteriose oral. Uma complicação comum da SSp é a infecção oral por Candida . Neste artigo, os autores descrevem métodos sistemáticos que podem diagnosticar efetivamente a infecção oral por Candida e identificar as cepas de Candida usando saliva, esfregaços de mucosa oral ou enxaguatório bucal de pacientes com SSP. O ágar dextrose de Sabouraud (SDA), o ensaio de formação de hifas, o teste de esfregaço de hidróxido de potássio (KOH) e o ensaio de coloração branca de calcofluor (CFW) são usados para o diagnóstico de infecção oral por Candida . Um ágar diagnóstico de Candida é usado para a identificação de cepas de Candida . Finalmente, o teste de suscetibilidade antifúngica é usado para determinar o tratamento adequado com medicamentos antifúngicos. Este método padronizado pode melhorar o diagnóstico, o tratamento e a pesquisa futura de infecções orais por Candida relacionadas à SSp. O diagnóstico precoce, usando este método, também pode prevenir quaisquer complicações decorrentes do atraso no tratamento adequado.
Introduction
A candidíase é causada por Candida spp., que são patógenos oportunistas. As cepas comuns incluem Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis e Candida dubliniensis1. As infecções oportunistas causadas por Candida spp. incluem infecções superficiais por Candida e candidíase invasiva. A candidíase invasiva ocorre principalmente em indivíduos imunocomprometidos; por exemplo, em pacientes com síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), a candidíase invasiva pode ameaçar significativamente a qualidade de vida ou mesmo a expectativa de vida2. A infecção superficial por Candida , como a candidíase mucocutânea, é mais comum em pacientes3.
A candidíase oral, uma infecção superficial por Candida , é a infecção fúngica humana mais comum. Candida albicans é um comensal normal da boca; a taxa de transporte de Candida spp. foi relatado como variando de 20% a 75% na população em geral sem nenhum sintoma4. O crescimento excessivo de Candida pode levar a desconforto local nos pacientes, como paladar alterado da sensação, sensação de queimação na boca, disfagia devido à má nutrição, recuperação retardada e internação prolongada. A candidíase oral a longo prazo pode levar à candidíase invasiva grave, resultando em morbidade e mortalidade significativas5. A candidíase oral também pode aumentar o risco de câncer bucal5. A função das glândulas salivares prejudicada está entre os fatores de risco para candidíase oral6. O início da infecção é a adesão de Candida às paredes celulares epiteliais. Isso é seguido pela proliferação e filamentação de Candida e pela formação e maturação do biofilme7. Os biofilmes são extremamente difíceis de erradicar e são resistentes ao tratamento antifúngico convencional, tornando o tratamento clínico um desafio para a infecção oral por Candida associada ao biofilme7.
A síndrome de Sjögren primária (SSp) é uma doença autoimune caracterizada por boca seca, olhos secos e outros sintomas sistemáticos8. A boca seca é o sintoma mais frequente da SSP. A saliva tem importantes funções antifúngicas fisiológicas. Por um lado, pode diluir e vasculhar a boca e, posteriormente, remover organismos da mucosa. Por outro lado, a saliva contém proteínas antimicrobianas, como lactoferrina, sialoperoxidase, lisozima, polipeptídeos ricos em histidina e anticorpos anti-candida específicos, que podem interagir com a mucosa oral e prevenir o crescimento excessivo de Candida6. O fluxo salivar reduzido pode predispor os pacientes com SSp à candidíase oral. Um estudo observacional transversal realizado em 61 pacientes com SSp constatou que 13,1% dos pacientes com SSp apresentavam sinais orais de candidíase e a unidade formadora de colônias (UFC)/mL de Candida albicans foi encontrada significativa e negativamente correlacionada com os níveis de saliva total não estimulada (UWS) e saliva total estimulada (SWS)9.
Os métodos introduzidos neste manuscrito podem identificar a infecção oral por Candida com base em atributos morfológicos caracterizados (por exemplo, hifas e células de levedura) em esfregaço direto ou após cultura10. A identificação da cepa de Candida usando um ágar diagnóstico de Candida é baseada na formação de colônias de diferentes cores com morfologia variada, que resultam da clivagem de substratos cromogênicos por enzimas espécie-específicas11. Neste manuscrito, são introduzidos métodos sistemáticos para detectar a infecção oral por Candida , incluindo a cultura oral tradicional de Candida e o exame rápido por teste de esfregaço de hidróxido de potássio (KOH) e ensaio de coloração branca de calcofluor (CFW)10. Além disso, foi introduzido o teste de suscetibilidade antifúngica, que pode orientar o tratamento clínico oral da infecção por Candida . Em situações reais, não é necessário executar todos os métodos introduzidos neste manuscrito; o(s) método(s) de detecção oral de Candida pode(m) ser selecionado(s) de acordo com a finalidade. O exame da infecção oral por Candida e a determinação de cepas de Candida em pacientes com SSp não apenas beneficiam o tratamento da doença, mas também ajudam a avaliar a caracterização da candidíase oral e os perfis das espécies.
Protocol
Representative Results
Discussion
No presente manuscrito, fornecemos uma série de métodos sistemáticos, simples e viáveis para detectar infecções orais por Candida , identificar cepas de Candida e testar a suscetibilidade antifúngica de medicamentos comumente usados em pacientes com SSP.
Em ambientes práticos, nem todos os métodos apresentados neste manuscrito são necessários. O(s) método(s) de detecção oral de Candida pode(m) ser escolhido(s) com base na finalidade específica. Os tes…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta pesquisa foi apoiada pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82201084), Fundação de Ciências de Pós-Doutorado da China (2022M722232), Fundação de Pesquisa de Pós-Doutorado de Pequim (2023-ZZ-020), Projeto Miaopu do Hospital Tiantan de Pequim, Capital Medical University (2023MP10) e Fundo Geral de Pesquisa, Conselho de Bolsas de Pesquisa de Hong Kong (27111820 e 17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
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