सिंगल सेल electroporation vivo में बरकरार विकासशील मस्तिष्क के भीतर
Summary
एकल सेल electroporation SCE () में vivo तैयारी में सहित बरकरार ऊतक के भीतर व्यक्ति की कोशिकाओं में डीएनए या अन्य बड़े अणुओं के वितरण की अनुमति एक विशेष तकनीक है. यहाँ एक फ्लोरोसेंट डाई या Xenopus laevis मेढक का डिंभकीट के बरकरार मस्तिष्क के भीतर न्यूरॉन्स में प्लास्मिड डीएनए के SCE के लिए हम प्रक्रिया विस्तार.
Abstract
एकल सेल electroporation SCE () में vivo तैयारी में सहित बरकरार ऊतक के भीतर व्यक्ति की कोशिकाओं में डीएनए या अन्य बड़े अणुओं के वितरण की अनुमति एक विशेष तकनीक है. इस तकनीक का विशिष्ट लाभ है कि प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती व्यक्ति की कोशिकाओं पर प्रदर्शन किया जा सकता है जबकि आसपास के ऊतकों अनछुए जा, जिससे वैश्विक उपचार से उत्पन्न उन लोगों से सेल स्वायत्त प्रभाव भेद. जब vivo इमेजिंग तकनीक में उन्नत के साथ संयुक्त, फ्लोरोसेंट मार्करों के SCE सेलुलर आकारिकी, सेल के विकास, और सेकंड से दिनों से लेकर timescales पर intracellular घटनाओं के प्रत्यक्ष दृश्य परमिट. हालांकि इस तकनीक vivo और पूर्व vivo तैयारी में की एक किस्म में प्रयोग किया जाता है, हम Xenopus laevis tadpoles में इस्तेमाल के लिए इस तकनीक अनुकूलित है. इस वीडियो लेख में, हम एक फ्लोरोसेंट डाई या विवर्ण Xenopus मेढक का डिंभकीट के बरकरार मस्तिष्क के भीतर न्यूरॉन्स में प्लास्मिड डीएनए के SCE के लिए प्रक्रिया विस्तार. हम भी तरीके चर्चा करने के लिए उपज अनुकूलन, और रहते fluorescently SCE द्वारा लेबल न्यूरॉन्स के दो photon प्रतिदीप्ति इमेजिंग के उदाहरण दिखा.
Protocol
Discussion
एकल सेल electroporation SCE () जीन समारोह का निर्धारण और लक्षित आनुवंशिक हेरफेर करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है. सूरजमुखी मनुष्य मेढक का डिंभकीट की पारदर्शिता और मस्तिष्क की पहुंच इस मॉडल आदर्श neuronal और एक जीवित जीव के भीतर…
Acknowledgements
लेखकों SCE micromicropipette सुझावों के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी छवियों के लिए फिल्म समय चूक एक अपरिपक्व न्यूरॉन और डेरेक Dunfield कैप्चरिंग विकास के लिए Sharmin हुसैन धन्यवाद.
References
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