תא יחיד electroporation in vivo בתוך המוח המתפתח אינטקט
Summary
תא בודד electroporation (SCE) היא טכניקה מיוחדת המאפשרת משלוח של ה-DNA או מקרומולקולות אחרים לתוך תאים בודדים בתוך הרקמה בשלמותה, כולל ההכנות vivo. כאן אנו בפירוט את הליך SCE של פלורסנט לצבוע או פלסמיד דנ"א לתוך הנוירונים במוח שלם של laevis Xenopus הראשן.
Abstract
תא בודד electroporation (SCE) היא טכניקה מיוחדת המאפשרת העברה של דנ"א או מקרומולקולות אחרים לתוך תאים בודדים בתוך הרקמה בשלמותה, כולל ההכנות vivo. היתרון הברור של שיטה זו הוא כי מניפולציות הניסוי עשוי להתבצע על תאים בודדים תוך השארת הרקמה שמסביב ללא שינוי, ובכך להבדיל תאים אוטונומיים תופעות הנובעות מאותם טיפולים העולמי. בשילוב עם טכניקות מתקדמות vivo הדמיה, SCE של סמנים ניאון היתרי להדמיה ישירה של מורפולוגיה הסלולר, גדילת התאים, והאירועים תאיים על לוחות הזמנים החל שניות ימים. בעוד טכניקה זו משמשת במגוון in vivo וההכנות vivo לשעבר, יש לנו אופטימיזציה טכניקה זו לשימוש הראשנים Xenopus laevis. במאמר זה וידאו, אנחנו בפירוט את הליך SCE של פלורסנט לצבוע או פלסמיד דנ"א לתוך הנוירונים במוח שלם של לבקנים Xenopus הראשן. כמו כן, אנו לדון בשיטות כדי לייעל תשואה, ולהראות דוגמאות הדמיה שני הפוטונים לחיות הקרינה של נוירונים שכותרתו fluorescently ידי SCE.
Protocol
Discussion
תא בודד electroporation (SCE) הוא כלי רב עוצמה לקביעת תפקוד הגן וביצוע מניפולציה גנטית ממוקדות. השקיפות של הראשן לבקן ואת הנגישות של המוח להפוך את מערכת מודל אידיאלי עבור הדמיה צמיחה עצבי ואירועים תאיים בתוך אורגניזם חי. SCE מאפשרת ויזואליזציה של צמיחה של נוירון בודד, ולבצע מניפולציות תאי?…
Acknowledgements
המחברים מודים Sharmin חוסיין לצמיחה זמן לשגות את הסרט לכידת של נוירון בשלה דרק Dunfield לתמונות במיקרוסקופ אלקטרונים של טיפים SCE micromicropipette.
References
- Bestman, J. E., Ewald, R. C., Chiu, S. L., Cline, H. T. In vivo single-cell electroporation for transfer of DNA and macromolecules. Nature Protocols. 1, 1267-1272 (2006).
- Dunfield, D., Haas, K. Single cell electroporation. Encyclopedia of Neuroscience (4th Ed.). , .
- Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo–from single cells to the entire brain. Differentiation. 70, 148-154 (2002).
- Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Cline, H. T. Single-cell electroporation for gene transfer in vivo. Neuron. 29, 583-591 (2001).
