Tek Hücre Elektroporasyon bozulmamış Gelişmekte olan beyin içindeki in vivo
Summary
Tek hücreli elektroporasyon (SCE), in vivo hazırlıkları da dahil olmak üzere sağlam doku içindeki tek tek hücrelerin içine DNA veya diğer makromoleküller teslim sağlayan özel bir tekniktir. Xenopus laevis larva bozulmamış beyin içinde nöronların bir floresan boya veya plazmid DNA SCE için burada ayrıntılarıyla prosedür.
Abstract
Tek hücreli elektroporasyon (SCE), in vivo hazırlıkları da dahil olmak üzere sağlam doku içindeki tek tek hücrelerin içine DNA veya diğer makromoleküller teslim sağlayan özel bir tekniktir. Bu tekniğin en belirgin avantajı, çevresindeki doku değişmeden bırakarak bu deneysel manipülasyonlar ve böylece küresel tedaviler sonucunda hücre özerk etkileri ayırt bireysel hücreleri üzerinde olabilir. Ileri in vivo görüntüleme teknikleri ile kombine edildiğinde, floresan belirteçlerin SCE hücresel morfoloji, hücre büyümesi ve hücre içi olayları saniye gün değişen zaman çizelgesi üzerinde doğrudan görselleştirme izin verir. Bu tekniği, in vivo ve ex vivo hazırlıkları içinde çeşitli olsa da, biz Xenopus laevis tetarlar kullanmak için bu tekniği optimize var. Bu video makalede, detaylı albino Xenopus larva bozulmamış beyin içinde nöronlar bir floresan boya veya plazmid DNA SCE prosedürü. Ayrıca verim optimize yöntemleri tartışmak ve canlı SCE tarafından floresan etiketli nöronlar iki foton floresan görüntüleme örnekler göstereceğiz.
Protocol
Discussion
Tek hücreli elektroporasyon (SCE), gen fonksiyonu belirleyen ve hedeflenen genetik manipülasyon yapmak için güçlü bir araçtır. Albino larva şeffaflık ve beyin erişilebilirlik Bu model sistem canlı bir organizma içinde nöronal büyüme ve hücre içi olayları görselleştirmek için ideal olun. SCE, tek bir nöronun büyüme görselleştirme izin verir, ve aksi halde değiştirilmemiş beynin içinde hücre özerk manipülasyonlar gerçekleştirebilirsiniz. Bu video makale Xenopus laevis tetarlar tek hücreli elektroporasyon i…
Acknowledgements
Yazarlar Sharmin Hossain SCE micromicropipette ipuçları elektron mikroskobu görüntüleri olgunlaşmamış bir nöron ve Derek Dunfield time-lapse yakalama büyüme için teşekkür ederiz.
References
- Bestman, J. E., Ewald, R. C., Chiu, S. L., Cline, H. T. In vivo single-cell electroporation for transfer of DNA and macromolecules. Nature Protocols. 1, 1267-1272 (2006).
- Dunfield, D., Haas, K. Single cell electroporation. Encyclopedia of Neuroscience (4th Ed.). , .
- Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo–from single cells to the entire brain. Differentiation. 70, 148-154 (2002).
- Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Cline, H. T. Single-cell electroporation for gene transfer in vivo. Neuron. 29, 583-591 (2001).
