Elektroporation von Mykobakterien

Summary

Mycobacterial pathogenen Strategien noch schwer abzuschätzen. Das langsame Wachstum der meisten Arten, die undurchdringliche Natur der Zellwand, und die Gefahren bei der Arbeit mit Erregern machen Mykobakterien schwer zu untersuchen und sind weitgehend verantwortlich für unsere armen Verständnis dieser Organismen. In diesem Video zeigen wir Ihnen die Technik der Elektroporation, die Unterwerfung Zellen beinhaltet einen kurzen hohen elektrischen Impuls, um den Eintrag von DNA ermöglichen. Es ist die am weitesten verbreitete Methode für die Einführung von DNA in Zellen Mykobakterien.

Abstract

Hoher Wirkungsgrad Transformation ist eine große Einschränkung in der Studie von Mykobakterien. Die Gattung Mycobacterium kann schwierig sein, zu verwandeln, das ist vor allem durch die dicken und wachsartigen Zellwand verursacht, sondern wird durch die Tatsache, dass die meisten molekularen Techniken entfernt-verwandte Arten wie Escherichia coli und Bacillus subtilis wurden entwickelt, verschärft. Trotz dieser Hindernisse haben mykobakterielle Plasmide identifiziert worden und DNA-Transformation vieler Mykobakterien Arten sind inzwischen beschrieben. Die erfolgreichste Methode zur Einführung von DNA in Mykobakterien ist die Elektroporation. Viele Parameter tragen zur erfolgreichen Transformation, dazu gehören die Art / Stamm, die Art der Umwandlung von DNA, die Selektionsmarker verwendet, das Nährmedium und die Bedingungen für die Elektroporation Puls. Optimierte Methoden zur Transformation der beiden Zeitlupen-und Winzer sind hier aufgeführt. Transformation Wirkungsgrade für verschiedene Mykobakterien Arten und mit verschiedenen Selektionsmarker gemeldet werden.