דיסקציה וצמיחה של תאים מאזור המוח הפרט מאפשר חקירה של פרמטרים פיזיולוגיים הסלולר. אנו מתארים שיטה culturing התא הראשוני שמייצר נוירון מועשר תרבויות בסביבה בסרום חופשי.
Abstract
המאפיינים הפיזיולוגיים של נוירונים בהיפוקמפוס נחקרות כלל, בעיקר בגלל מעורבותו של ההיפוקמפוס בלמידה ובזיכרון. תא ראשי culturing בהיפוקמפוס מאפשר מדעני מוח כדי לבחון את פעילות ומאפיינים של הנוירונים בתא הבודד וברמת סינפסה אחת. בסרטון זה נדגים כיצד לבודד ולגדל תאים בהיפוקמפוס של חולדות ראשוני לרך הנולד. ההיפוקמפוס עשוי להיות מבודד כל חיה הנולד בקיצור כמו 2 עד 3 דקות, ואת התרבויות יכול להישמר לתקופה של עד שבועיים. אנו גם בקצרה להדגים כיצד להשתמש אלה נוירונים בהיפוקמפוס הדמיה סידן ratiometric. בעוד פרוטוקול זה מתאר את התהליך עבור בהיפוקמפוס, עם קצת שינוי לא, זה יכול להיות מיושם על אזורים אחרים של המוח.
Protocol
לפני בידוד בהיפוקמפוס לפני תחילת הבידוד בהיפוקמפוס, לוודא שכל הכלים הם עקרים. תרסיס את מכסה המנוע תרבות עם אתנול 70%, ואת המקום כלים בתוך מכסה המנוע. יהיה עליך 6 – ו 10 ס"מ צלחות פטרי, סטרילי poly-L coverslips זכוכית מצופה, pipettors וטיפים, טפטפות…
Discussion
פרוטוקול זה פותח כשינוי העבודה הזרע של גארי בנקאי וקים Goslin 1. ספר זה הוא משאב חיוני עבור מי שמעוניין תאים culturing – לא רק נוירון מועשר תרבויות המתואר בפרוטוקול הנוכחי.
שלושת הגורמים הקריטיים ביותר culturing התא הם: עקרות מהירות, הבחירה של שימוש בינוני.