A dissecção e crescimento de células de uma área do cérebro individuais facilita investigação de parâmetros celulares e fisiológicos. Nós descrevemos um método para cultivo de células primárias, que produz neurônios enriquecido culturas em um ambiente sem soro.
Abstract
As propriedades fisiológicas de neurônios do hipocampo são comumente investigado, especialmente por causa do envolvimento do hipocampo na aprendizagem e memória. Cultura de células primárias do hipocampo permite que os neurocientistas para examinar a atividade e as propriedades dos neurônios na célula individual e nível de sinapse único. Neste vídeo, vamos demonstrar como isolar e cultivar células primárias de hipocampo de ratos recém-nascidos. O hipocampo pode ser isolado de cada animal recém-nascido em tão curto quanto 2 a 3 minutos, e as culturas podem ser mantidas por até duas semanas. Também vamos brevemente demonstrar como usar esses neurônios do hipocampo para a imagem latente de cálcio raciométrica. Embora este protocolo descreve o processo para o hipocampo, com pouca ou nenhuma modificação, ele pode ser aplicado a outras regiões do cérebro.
Protocol
Antes de isolamento do hipocampo Antes de iniciar o isolamento do hipocampo, certifique-se que todas as ferramentas são estéreis. Spray para baixo do capô cultura com etanol 70%, e colocar as ferramentas dentro do capô. Você vai precisar 6 – e os pratos de Petri de 10 cm, estéril poli-L lamínulas de vidro revestido, pipetadores e dicas, pipetas descartáveis, e um pipetador elétrica. Deste ponto em diante, lembre-se de usar a técnica estéril correta. Ligue o banho de águ…
Discussion
Este protocolo foi desenvolvido como uma modificação do trabalho seminal de Gary Banker e Goslin Kim 1. Este livro é um recurso essencial para qualquer pessoa interessada em células de cultura – não apenas as culturas de neurônios enriquecido descritos no protocolo atual.
Os três fatores mais críticos em cultura de células são: velocidade de esterilidade, a escolha do meio utilizado.
Esterilidade – fluxo laminar um / capa estéril, condições assépticas, e uma incubadora de estéreis s…