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Chapters
- 00:05Title
- 01:07Cell Harvest and Lysis
- 01:55Ni-affinity Purification of Hsp104
- 03:16FPLC Purification of Hsp104
- 05:14Representative Results for Hsp104 Purification and Assessment of Disaggregation Activity
- 07:04Conclusion
Aquí se describe un protocolo para la purificación de gran actividad Hsp104, un AAA hexameric + proteína de la levadura, que se acopla la hidrólisis de ATP con el desglose de proteínas. Este esquema se aprovecha de una construcción de His6-etiquetados para la purificación de afinidad de<em> E. coli</em> Seguido por cromatografía de intercambio aniónico, His6-tag con la eliminación de la proteasa TEV, y la cromatografía de exclusión por tamaño.
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PurificationHsp104Protein DisaggregaseHexameric AAA+ ProteinATP HydrolysisProtein DisaggregationRenaturationDisordered AggregatesHeat ShockCross-beta Amyloid FibrilsPrionsPhenotypic VariationPreamyloid OligomersE. Coli Orthologue ClpBHsp104 OrthologuesAnimal CellsTherapeutic AgentNeurodegenerative DiseasesMisfolding Of ProteinsToxic Preamyloid OligomersAmyloid Fibrils
