A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells

00:05Title
00:52Transfecting of HEK-293T Cells Using Calcium Phosphate
02:19Harvesting Virus
02:50Concentration of Viral Particles by Ultracentrifugation
05:11Esimating of Viral Titers Using p24-enzyme-linked Immunosorbent Assay
07:31Counting GFP-positive Cells
08:25Results: Production and Validation of the Knockout-efficiency of Integrase-deficient Lentiviral-CRSPER/Cas9 Vector
09:57Conclusion

Summary

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Descriviamo la strategia di produzione di vettori lentivirali integrasi-carente (IDLVs) come veicoli per la consegna di CRISPR/Cas9 alle cellule. Con una capacità di mediare rapido e robusto gene modifica nelle celle, IDLVs presentare una più sicura e piattaforma altrettanto efficace vettore per la consegna del gene rispetto ai vettori integrasi-competente.

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