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Absolute Quantifizierung des zellfreien Proteinsynthesestoffwechsels durch Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Absolute Quantification of Cell-Free Protein Synthesis Metabolism by Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry
DOI:

08:06 min

October 25, 2019

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:01Preparation for Aniline Tagging
  • 02:41Labeling Reaction and LC/MS Procedure
  • 06:06Results: Identification and Labeling Results of Metabolites
  • 07:02Conclusion

Summary

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Hier präsentieren wir ein robustes Protokoll zur Quantifizierung von 40 Verbindungen, die am zentralen Kohlenstoff- und Energiestoffwechsel in zellfreien Proteinsynthesereaktionen beteiligt sind. Das zellfreie Synthesegemisch wird mit Anilin zur effektiven Trennung mittels umgekehrter Flüssigchromatographie abgeführt und dann durch Massenspektrometrie unter isotopisch gekennzeichneten internen Standards quantifiziert.

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