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Quantificação absoluta do metabolismo da síntese de proteínas livres de células por cromatografia líquida de fase reversa-espectrometria
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JoVE 신문 생화학
Absolute Quantification of Cell-Free Protein Synthesis Metabolism by Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

Quantificação absoluta do metabolismo da síntese de proteínas livres de células por cromatografia líquida de fase reversa-espectrometria

DOI:
10.3791/60329-v

•

08:06 min

•

October 25, 2019

•

, , , ,
1Robert Frederick Smith School of Chemical and Biomolecular Engineering,Cornell University

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:01Preparation for Aniline Tagging
  • 02:41Labeling Reaction and LC/MS Procedure
  • 06:06Results: Identification and Labeling Results of Metabolites
  • 07:02Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo robusto para quantificar 40 compostos envolvidos no metabolismo central de carbono e energia em reações de síntese de proteínas livres de células. A mistura de síntese livre de células é derivada com aniline para separação eficaz usando cromatografia líquida de fase invertida e, em seguida, quantificada pela espectrometria de massa usando padrões internos isotópicos rotulados.

Tags

Cell-free Protein SynthesisMetabolite QuantificationReversed-phase Liquid Chromatography-mass SpectrometryAniline TaggingIsotopic LabelingCentral Carbon MetabolismEnergy Metabolism

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