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Messung der Zusammensetzung von CD95 Death-Inducing Signaling Complex und Verarbeitung von Procaspase-8 in diesem Komplex
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Measuring Composition of CD95 Death-Inducing Signaling Complex and Processing of Procaspase-8 in this Complex
DOI:

07:17 min

August 02, 2021

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Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:44Preparing Cells and CD95L Stimulation
  • 01:11Cell Harvest and Lysis
  • 02:29Immunoprecipitation
  • 03:28Western Blot
  • 04:21Western Blot Detection
  • 05:05Analysis of CD95 DISC Formation in HeLa-CD95 cells, c-FLIPL-overexpressing HeLa-CD95 cells, and Primary T Cells
  • 06:25Conclusion

Summary

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Hier wird ein experimenteller Workflow vorgestellt, der den Nachweis der Caspase-8-Verarbeitung direkt am todesinduzierenden Signalkomplex (DISC) ermöglicht und die Zusammensetzung dieses Komplexes bestimmt. Diese Methodik hat breite Anwendungen, von der Entschlüsselung der molekularen Mechanismen von Zelltodwegen bis hin zur dynamischen Modellierung von Apoptose-Netzwerken.

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