Summary

微接触印刷的蛋白细胞生物学

Published: December 05, 2008
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Summary

微接触印刷被广泛使用模式的蛋白质和其他分子在材料表面。我们展示这一过程的基本步骤,冲压到玻璃纤维连接蛋白的模式。

Abstract

模式到基板的蛋白质和其他生物大分子的能力是非常重要的捕捉外环境的空间复杂性。微接触印刷的发展怀特赛德斯组(<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> http://gmwgroup.harvard.edu/</a>)在20世纪90年代中期revolutionalized这​​一领域,微电子/微细加工技术,生命科学重点​​实验室访问。这种方法的初步实现,用于聚二甲基硅氧烷(PDMS)邮票上创建材料表面的功能化化学品模式<sup> 1</sup>。从那时起,已经开发了一系列创新的方法模式的其他分子,包括蛋白质<sup> 2</sup>。这个视频演示的创造的PDMS邮票的基本过程和使用模式的蛋白质,这些步骤是很难准确地用言语表达。我们专注于盖玻片作为一个具体的例子,图案到细胞外基质蛋白纤维连接蛋白图案。微接触印刷过程中的一个重要组成部分,是拓扑的主,从投邮票;主的升高和降低的地区,都反映到邮票,并确定最终的模式。通常情况下,主涂层与光致抗蚀剂,然后通过光刻图案硅片组成,都是在这里完成。包含一个特定的模式创建的主人,需要专门的设备,最好是在与一个制造中心或设施咨询走近。然而,几乎任何与拓扑结构的基板可以被用来作为一个高手,如塑料光栅(见一个例子试剂),和这样的偶然的主人提供现成的,简单的模式。该协议开始掌握在手的点。

Protocol

1。解决方案和材料的制备这些步骤应该进行提前几天。 盖玻片。盖玻片清洗浸泡10分钟到一个解决方案Linbro 7X清洁剂:水混合1:3的比例和加热,搅拌,直到明确。盖玻片被广泛冲洗去离子水,然后在450℃烘烤6小时。装入陶瓷染色架盖玻片(见试剂)简化了这个过程。 蛋白质溶液冲压。重组纤维连接蛋白的1 mg / ml浓度的原液制造商的说明。 2。从拓扑…

Discussion

微接触印刷过程的概念很简单,非常强大的,已被应用于各种基材上的广泛的分子图案。然而,这个过程仍然是一门艺术的东西。创建,该模式的具体几何图案的蛋白质,适用于重量,和涂料/冲压条件都影响冲压件的质量。例如,过小,重量轻,适用于大的特点,往往在模式中的正确的标志在图上可以看到差距的结果。 1A。相反,过多的重量会导致下垂和邮票的崩溃,造成意想不到的沉积蛋白质在图案之间的地…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Plasma Cleaner   Harrick Scientific Products, Inc. PDC-32G  
Desiccator   Nalgene 5315-0150  
PBS Reagent Invitrogen 10010-072  
Protein labeling kit Reagent Invitrogen A30006  
Fibronectin Reagent Sigma-Aldrich F2006  
Staining rack Reagent Thomas Scientific 8542E40  
Coverslips Reagent Fisher Scientific 12-544-12  
Sylgard 184 Reagent Ellsworth Adhesives 184 Sil Elast Kit  
Diffraction Grating Reagent Edmund Scientific 3040267  

Referências

  1. Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
  2. Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
  3. St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
  4. Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
  5. Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
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  7. Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
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Citar este artigo
Shen, K., Qi, J., Kam, L. C. Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology. J. Vis. Exp. (22), e1065, doi:10.3791/1065 (2008).

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