세포 생물학을위한 단백질의 Microcontact 인쇄
Summary
Microcontact 인쇄는 소재 표면에 패턴 단백질 및 다른 분자로 광범위하게 사용됩니다. 우리는 유리에 fibronectin의 패턴을 스탬핑,이 과정의 기본 단계를 보여줍니다.
Abstract
패턴 단백질과 기판에 다른 biomolecules 수있는 능력은 세포외 환경의 공간적 복잡도를 캡처하는 것이 중요합니다. 와이트 그룹에 의해 microcontact 인쇄의 개발 (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> http://gmwgroup.harvard.edu/</a>) 1990 년대 중반 마이크로 일렉 트로닉스 / 생명 과학에 초점을 실험실에 액세스할 수 microfabrication 기술을 제작하여이 필드를 revolutionalized. polydimethylsiloxane (PDMS) 우표는 재료 표면에 작용 화학 물질의 패턴을 만드는 데 사용되는이 방법의 초기 구현<sup> 1</sup>. 이후, 혁신적인 접근 방법의 범위는 단백질을 포함한, 패턴 다른 분자로 개발되었습니다<sup> 2</sup>. 이 동영상은 PDMS 스탬프를 만드는 기본적인 과정을 보여주는 이러한 단계를 정확하게 말로 표현하기가 어렵습니다 같은 패턴 단백질로 사용합니다. 우리는 patterning patterning의 구체적인 예를 들어 유리 coverslips에 세포외 기질 단백질 fibronectin에 중점을두고 있습니다. microcontact 인쇄 과정의 중요한 구성 요소는 우표가 캐스팅되는에서 topological 마스터이며 주인의 인상과 인하 지역은 스탬프로 미러링하여 최종 패턴을 정의하고 있습니다. 일반적으로, 마스터가 포토 레지스트로 코팅하고 석판술에 의해 패턴 실리콘 웨이퍼로 이루어져, 여기는 다이기 때문입니다. 특정 패턴을 포함하는 주인의 창조는 전문 장비를 필요로하고, 최고의 제조 센터 또는 시설과 상담에 접근합니다. 그러나, 토폴로지와 함께 거의 모든 기판 등 플라스틱 회절 통같이로 마스터, (한 예를 들어 시약 참조)로 사용하고, 같은 serendipitous 주인은 즉시 사용할 수, 간단한 패턴을 제공할 수 있습니다. 이 프로토콜은 손에 마스터를 둔 지점에서 시작됩니다.
Protocol
Discussion
microcontact 인쇄 과정은 patterning 기판의 다양한 분자의 광범위한 적용을 받으면, 개념 간단하고 매우 견고합니다. 그러나,이 과정은 예술의 무언가 남아있다. 만들 수있는 패턴의 특정 기하학이 단백질 패턴으로 적용, 무게, 도장 / 스탬프 조건은 모든 스탬핑 품질에 영향을 미칩니다. 예를 들어, 자주 큰 기능 그림의 오른쪽 상단 로고에서 볼 수 있듯이 패턴의 격차 결과에 적용도 약간의 무게. 1A. 반대로, 너무 많?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
Referências
- Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
- Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
- Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).
- Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
