الطبعة Microcontact من البروتينات لبيولوجيا الخلية
Summary
ويستخدم على نطاق واسع لطباعة Microcontact نمط البروتينات والجزيئات الأخرى على السطوح المادية. نحن لشرح الخطوات الأساسية لهذه العملية ، وختم أنماط فبرونيكتين على الزجاج.
Abstract
القدرة على نمط البروتينات والجزيئات الحيوية الأخرى على ركائز مهمة لالتقاط التعقيد المكاني للبيئة خارج الخلية. تطور الطباعة microcontact من قبل مجموعة ايتسايدز (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> http://gmwgroup.harvard.edu/</a>) في منتصف 1990s تشهد ثورة هذا المجال من خلال جعل الالكترونيات الدقيقة / تقنيات التصنيع الدقيق للوصول إلى المختبرات التي تركز على علوم الحياة. تطبيقات الأولية لهذه الطريقة تستخدم polydimethylsiloxane (PDMS) طوابع لخلق أنماط للمواد الكيميائية على الأسطح المواد functionalized<sup> 1</sup>. منذ ذلك الحين ، تم تطوير مجموعة من الأساليب المبتكرة لنمط الجزيئات الأخرى ، بما في ذلك البروتينات<sup> 2</sup>. هذا الفيديو يوضح العملية الأساسية لخلق الطوابع PDMS ويستخدمها لنمط البروتينات ، حيث أن هذه الخطوات هي من الصعب التعبير عنها بدقة في الكلمات. ونحن نركز على الزخرفة البروتين المصفوفة خارج الخلية فبرونيكتين coverslips على الزجاج كمثال محدد من الزخرفة. عنصرا هاما من عملية الطباعة microcontact هو سيد طوبولوجي ، التي هي من الزهر على الطوابع ، وتنعكس في المناطق التي أثيرت وخفضت من الماجستير في الطوابع وتحديد نمط النهائي. عادة ، على درجة الماجستير تتكون من رقاقة السليكون مغلفة مقاومة للضوء ومن ثم من قبل ضوئيه منقوشة ، كما هو الحال هنا. إنشاء سادة تحتوي على نمط معين يتطلب معدات متخصصة ، وأفضل السبل بالتشاور مع مركز تصنيع أو مرفق. ومع ذلك ، يمكن استخدام أي ما يقرب من الركيزة مع طوبولوجيا كمعلم ، مثل حيود حواجز شبكية من البلاستيك (انظر الكواشف لمثال واحد) ، وتوفر هذه الصدفة سادة متاحة بسهولة ، وأنماط بسيطة. هذا البروتوكول تبدأ عند نقطة وجود رئيسي في متناول اليد.
Protocol
Discussion
عملية الطباعة microcontact المفهوم بسيط وقوي جدا ، بعد أن تم تطبيقه على الزخرفة مجموعة واسعة من الجزيئات على مجموعة متنوعة من ركائز. ومع ذلك ، فإن هذه العملية لا تزال شيئا من الفن. هندسة محددة لنمط المزمع إنشاؤها ، لتكون منقوشة البروتين والوزن التطبيقية ، وطلاء / الشروط ختم كل ذلك يؤثر …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
Referências
- Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
- Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
- Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).
- Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
