Microcontact הדפסה של חלבונים עבור ביולוגיה של התא
Summary
הדפסה Microcontact נעשה שימוש נרחב על חלבונים ומולקולות אחרות דפוס על משטחי חומר. אנו מדגימים את השלבים הבסיסיים של תהליך זה, ביול דפוסים של פיברונקטין על זכוכית.
Abstract
היכולת חלבונים דפוס ביומולקולות אחרים על גבי מצעים חשוב לתפוס את המורכבות של הסביבה המרחבית תאיים. פיתוח והדפסה microcontact ידי קבוצת Whitesides (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> Http://gmwgroup.harvard.edu/</a>) באמצע 1990 revolutionalized בשדה זה על ידי ביצוע המיקרואלקטרוניקה / טכניקות microfabrication נגיש מעבדות מתמקדת במדעי החיים. יישום ראשוני של שיטה זו בשימוש polydimethylsiloxane (PDMS) בולים ליצור דפוסים של כימיקלים פונקציונליות על משטחים חומר<sup> 1</sup>. מאז, מגוון של גישות חדשניות פותחו מולקולות דפוס אחרים, לרבות חלבונים<sup> 2</sup>. וידאו זה מדגים את התהליך הבסיסי של יצירת בולים PDMS, ומשתמשת בהם כדי חלבונים דפוס, כמו צעדים אלה קשה לבטא במדויק במילים. אנו מתמקדים דפוסים תאי מטריקס החלבון פיברונקטין על coverslips זכוכית כדוגמה ספציפית של דפוסים. מרכיב חשוב בתהליך ההדפסה microcontact הוא אמן טופולוגי, שממנו בולים נוצקו; האזורים הרים והוריד של המאסטר משתקפים אל הבול ולהגדיר את הדפוס הסופי. בדרך כלל, מאסטר מורכב סיליקון ופל מצופה photoresist ואז בדוגמת ידי photolithography, כפי שנעשה כאן. יצירה של אדונים המכיל דפוס מסוים דורש ציוד מיוחד, והוא ניגש הטוב בהתייעצות עם מרכז ייצור או מתקן. עם זאת, כמעט כל מצע עם טופולוגיה יכול לשמש אמן, כגון gratings עקיפה פלסטיק (ראו למשל ריאגנטים אחד), האדונים מקרית כזה לספק זמינים, דפוסי פשוטה. פרוטוקול זה מתחיל בנקודה שיש מאסטר ביד.
Protocol
Discussion
תהליך ההדפסה microcontact היא פשוטה מבחינה מושגית חזקים מאוד, לאחר הוחל על דפוסים מגוון רחב של מולקולות על מגוון מצעים. עם זאת, תהליך זה נשאר משהו של האמנות. הגיאומטריה מסוים של דפוס להיווצר, חלבון להיות בדוגמת, משקל מוחל, ציפוי / הטבעה כל התנאים להשפיע על איכות הטבעה. לדוגמה, גם משקל קטן…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
Referências
- Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
- Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
- Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).
- Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
