Proteinlerin Hücre Biyolojisi Microcontact Baskı
Summary
Microcontact baskı malzemesi yüzeylerde desen proteinleri ve diğer molekülleri yaygın bir biçimde kullanılmaktadır. Biz fibronektin cam üzerine desen damgalama, bu sürecin temel adımları göstermektedir.
Abstract
Desen proteinleri ve diğer substratlar üzerine biyomoleküllerin yeteneği ekstrasellüler çevre mekansal karmaşıklığı yakalamak için önemlidir. Whitesides grup tarafından microcontact baskı Gelişimi (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> Http://gmwgroup.harvard.edu/</a>) 1990'ların ortalarında mikroelektronik / yaşam bilimleri üzerine odaklanmıştır laboratuarlara imalat teknikleri yaparak bu alanda revolutionalized. Polidimetilsiloksan (PDMS) pulları malzeme yüzeyleri Fonksiyonlu kimyasalların desenleri oluşturmak için kullanılan bu yöntem ilk uygulamaları<sup> 1</sup>. O zamandan beri, proteinler de dahil olmak üzere bir dizi yenilikçi yaklaşımlar, desen diğer moleküllerin geliştirilmiştir var<sup> 2</sup>. Bu video PDMS pulları yaratmanın temel sürecini gösterir ve bu adımları doğru kelimelerle ifade etmek zor olduğundan, desen proteinler için bunları kullanır. Biz desenlendirme ekstrasellüler matriks proteini fibronektin desenlendirme belirli bir örnek olarak cam lamelleri üzerine odaklanır. Microcontact baskı sürecinin önemli bir bileşeni pulları dökme topolojik master, ana kaldırdı ve alçaltılmış bölgelerde damga yansıtılmış ve son deseni tanımlamak. Tipik olarak, bir ana, fotorezist ile kaplı ve sonra fotolitografi ile desenli bir silikon gofret oluşur, burada yapıldığı gibi. Belirli bir desen içeren ustaların oluşturulması, özel ekipman gerektirir ve en iyi bir imalat merkezi veya tesis ile istişare yaklaştı. Ancak, topoloji ile hemen hemen herhangi bir yüzeye plastik gibi kırınım ızgaralar gibi bir usta, (bir örnek için Reaktifler) olarak kullanılır ve bu tür şans eseri ustaları hazır, basit desenler sağlamak olabilir. Bu protokol, elinde bir ana noktada başlar.
Protocol
Discussion
Microcontact baskı işlemi desenlendirme moleküllerin geniş bir yelpazede çeşitli yüzeylere uygulanabilir olan, kavramsal olarak basit ve çok sağlam. Ancak bu süreç, bir sanat bir şey kalır. Desen oluşturulacak özel geometri, protein desenli, uygulanan ağırlık ve kaplama / damgalama koşulları damgalama kalitesini etkileyebilir. Örneğin, sık sık büyük özellikleri, desen Şekil sağ üst logosu görülebileceği gibi boşlukları sonuçları uygulanan çok az ağırlık,. 1A. Tersine, çok fazla kilo plazma tedavisi …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
Referências
- Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
- Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
- Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).
- Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
