Homing von hämatopoetischen Zellen im Knochenmark

Summary

Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll, mit dem Homing von hämatopoetischen Zellen, ihre Nischen im Knochenmark zu studieren.

Abstract

Homing ist das Phänomen, dass transplantierte hämatopoetische Zellen sind in der Lage zu erreichen und einprägen Reise-oder niederlassen in das Knochenmark. Verschiedene chemomkines und Rezeptoren sind in der Homing von hämatopoetischen Stammzellen beteiligt sind. [1, 2]

Dieser Beitrag skizziert die klassische Homing-Protokoll in hämatopoetischen Stammzellen Studien verwendet. Im Allgemeinen besteht die Isolierung des Zell-Population, deren Referenzierung muss untersucht werden, Färbung dieser Population mit einem Farbstoff der Zinsen und Injektion dieser Zellen in die Blutbahn des Empfängers Tier. Der Empfänger Tier wird dann bei einer vorbestimmten Zeit nach der Injektion und dem Knochenmark für die prozentuale oder absolute Anzahl der Zellen, die positiv sind für den Farbstoff von Interesse ausgewertet geopfert. In einer der häufigsten experimentellen Systemen, die Homing-Effizienz von hämatopoetischen Zellen von zwei genetisch verschiedene Tiere (ein Wildtyp-Tier und die entsprechenden knock-out) verglichen wird. Dieser Artikel beschreibt das hämatopoetische Zellen Homing-Protokoll im Rahmen der, wie zu experimentieren.

Protocol

Wir beginnen die Homing Experiment durch Extrahieren von Zellen im Experiment verwendet werden. Aus diesem aktuellen Experiment, das wir wollen wissen, interessiert, wenn die Referenzfahrt der gesamte Knochenmark zu den Nischen in den langen Knochen des Empfängers Tieren unterscheidet sich für Knochenmark-Zellen aus WT Tieren wie C57BL/6J (WT) extrahiert und jene, die transgene sind Vorprägungen für Lysophosphatidsäure-Rezeptor 1 (LPAR1) (KO). Bevor wir den Versuch starten, die wir sammeln die Materialien, die wir für d…

Discussion

Homing ist der Prozess, durch Knochenmarkszellen wie Stammzellen, Vorläuferzellen und differenzierte Zellen, ihren Weg in das Knochenmark, nachdem sie in die Blutbahn oder Knochenmarkshöhle von Mäusen injiziert. Wie aus der Definition, kann ein Wissenschaftler wählten die Homing von hämatopoetischen Stammzellen, Vorläuferzellen oder differenzierten Zellen durch Immunphänotypisierung identifiziert und isoliert durch Zellsortierung zu studieren. Typischerweise Wissenschaftler injizieren Knochenmarkzellen für Linie…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline		Mediatech, Inc	21-031-CV
Sterile Fetal Bovine Serum		Valley Biomedical, Inc	BS3033
0.5M EDTA (pH 8.0)		Boston BioProducts	BM-150
Tryphan Blue solution		Mediatech, Inc	25-900-CI
ACK Lysing Buffer		Lonza	10-548E
Isopropranolol U.S.P.		Denison Pharmaceuticals, Inc
Vybrant DiD cell-labelling solution		Invitrogen	V22887
Vybrant DiI cell-labelling solution		Invitrogen	V22885