Este protocolo demonstra como executar imunohistoquímica em dissecados larva Drosophila.
Abstract
O<em> Drosophila</em> Junção neuromuscular (MNJ) é um sistema modelo estabelecido utilizada para o estudo do desenvolvimento e plasticidade sináptica. O uso generalizado do<em> Drosophila</em> Motor do sistema é devido a sua alta acessibilidade. Ele pode ser analisado com uma única célula de resolução. Há 30 músculos por hemisegment cuja disposição dentro da parede do corpo periféricos são conhecidas. Um total de 31 neurônios motores atribuem a estes músculos em um padrão que tem alta fidelidade. Utilização da biologia molecular e genética, pode-se criar animais transgênicos ou mutantes. Então, pode-se estudar as conseqüências do desenvolvimento sobre a morfologia ea função do MNJ. Imuno-histoquímica pode ser usado para imagem claramente os componentes do MNJ. Neste artigo, vamos demonstrar como usar a coloração de anticorpos para visualizar a<em> Drosophila</em> Larval MNJ.
Protocol
Antes de começar a Prepare as seguintes soluções: PBT (0,1% Triton X100 em 1X PBS), PBTB (0,2% BSA em PBT), e PBTN (NGS 2% em PBTB). Dissecar as larvas Drosophila. Consulte Drosophila larval Dissection MNJ. Imuno-histoquímica Mover as larvas a um tubo de 1,5 ml contendo PBT. Lavar as larvas duas vezes por 15 minutos no PBT. Nota: para lavar, coloque o tubo de 1,5 ml em um misturador nutator. Remover o líquido com um pippeto…
Discussion
Imuno-histoquímica (IHQ) é vital para o estudo da biologia MNJ, pois permite a visualização do MNJ. Isto é conseguido usando anticorpos que reconhecem a membrana neuronal (por exemplo, HRP), o presynapse (por exemplo, CSP, SYT), e / ou o postsynapse (por exemplo, DLG). Moléculas sinalizadoras, proteínas estruturais, ou novas proteínas de interesse também pode ser manchada. Então, os genes podem ser mutado ou missexpressed e IHC pode detectar perturbação da estrutura sináptica e / ou de sinalização neurona…