Drosophila Larven NMJ Immunhistochemie
Summary
Dieses Protokoll zeigt, wie Immunhistochemie auf seziert Drosophila Larve führen.
Abstract
Die<em> Drosophila</em> Neuromuskulären Synapse (NMJ) ist ein etabliertes Modellsystem für die Untersuchung der synaptischen Entwicklung und Plastizität eingesetzt. Die weit verbreitete Verwendung des<em> Drosophila</em> Motor-System ist aufgrund seiner hohen Verfügbarkeit. Es kann mit Single-Cell-Auflösung analysiert werden. Es gibt 30 Muskeln pro hemisegment deren Anordnung innerhalb des peripheren Körper Wand bekannt sind. Insgesamt 31 Motoneuronen, diese Muskeln legen in ein Muster, das high fidelity hat. Mit Molekularbiologie und Genetik, kann man transgene Tiere oder Mutanten. Dann kann einer Studie der Entwicklung Auswirkungen auf die Morphologie und Funktion der NMJ. Immunhistochemie kann eindeutig Bild die Komponenten des NMJ verwendet werden. In diesem Artikel zeigen wir, wie Antikörper-Färbung verwenden, um die Visualisierung<em> Drosophila</em> Larven NMJ.
Protocol
Discussion
Immunhistochemie (IHC) ist von entscheidender Bedeutung für das Studium der Biologie, weil es NMJ Visualisierung der NMJ ermöglicht. Dies wird durch die Verwendung von Antikörpern, dass die neuronalen Membran (zB HRP), der Präsynapse (zB CSP, SYT), und / oder die Postsynapse (zB DLG) erkennen erreicht. Signalmoleküle, Strukturproteine, oder neuartige Proteine von Interesse kann auch gefärbt werden. Dann können Gene mutiert oder missexpressed werden, und IHC können Störung der synaptischen Struktur und / o…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
Referências
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
