العزلة والحيوان التوسع الحرة المصل الحبل السري الإنسان المستمدة الخلايا اللحمية الوسيطة (MSCS) وغشائي خلايا مستعمرة السلف التشكيل (ECFCs)
Summary
هذا البروتوكول وصف العزلة والتوسع اللاحق في خلايا انسجة وخلايا اللحمة المتوسطة مستعمرة البطانية التي تشكل من دون استخدام الحيوان مصل لتوليد أزواج ذاتي لأغراض زراعة تجريبية.
Abstract
الحبل السري مصدرا غنيا للخلايا الاصلية مع إمكانات عالية التكاثري بما في ذلك الخلايا اللحمية الوسيطة (وتسمى أيضا الخلايا الجذعية الوسيطة ، MSCS) والخلايا البطانية التي تشكل مستعمرة السلف (ECFCs). كلا النوعين من الخلايا اللاعبين الرئيسيين في المحافظة على سلامة الأنسجة وربما تشارك أيضا في عمليات التجدد وتشكيل الأورام.
لدراسة البيولوجيا وظيفة بطريقة نسبية من المهم أن يكون كل أنواع الخلايا المتاحة من الجهات المانحة نفسها. قد يكون من المفيد أيضا لأغراض التجدد واللجان الدائمة لاستخلاص ECFCs من النسيج نفسه.
لأن العلاجات الخلوية وينبغي أن تجد طريقها من مقاعد البدلاء إلى جانب السرير أنشأنا طريقة جديدة لعزل وتوسيع الخلايا الاصلية من دون استخدام البروتين الحيواني. استبدال تجمع الصفيحات lysate الإنسان (pHPL) مصل بقري جنيني في جميع خطوات بروتوكول جهدنا لتجنب الاتصال تماما من الخلايا البروتينات لأعضاء غير بشرية.
هذا الفيديو يوضح منهجية لعزل وتوسيع الخلايا الاصلية من الحبل السري واحد.
وسيتم شرح جميع المواد والإجراءات.
Protocol
Discussion
هناك مجموعة متنوعة من المصادر التي تحصل على اللجان الدائمة أو ECFCs بما نخاع العظام ، والأنسجة الدهنية ، دم الحبل السري ، الخ.
فمن الضروري الحصول على كلا النوعين من الأسلاف من المصدر نفسه للمقارنة مباشرة إشراك أنواع مختلفة من الخلا?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر كاتارينا Schallmoser لتوفير pHPL ، إيفا ورود هوفمان نيكول للتعليقات مفيدة للمخطوطة ، ومارغريتا دانييلا ثالر hwirth الأب للحصول على المساعدة التقنية ، ومونيكا لتحرير فاريل لغوية ، لانج أوفه ، Holzapfel مارجيت وساندرا Eppich في قسم التوليد لتوفير الحبال.
وقد تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة الأبحاث النمساوية (FWF ، منح N211 – NAN إلى DS) ، لتعزيز البحوث النمساوية وكالة (FFG ، ومنحة لN200 DS) والخلايا الجذعية للبالغين ومؤسسة أبحاث (ع). AR وزميل في الطب الجزيئي برنامج الدكتوراه من كلية الطب بجامعة غراتس.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
Referências
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
