ヒト臍帯由来間葉系幹細胞（MSCs）と血管内皮コロニー形成前駆細胞（ECFCs）の単離および動物血清自由膨張
Summary
このプロトコルは、間葉系幹細胞および実験的移植の目的のために自己のペアを生成するために動物血清を使用することなく、内皮コロニー形成細胞の分離とその後の展開について説明します。
Abstract
へその緒は、間葉系幹細胞（とも呼ばれる間葉系幹細胞は、MSC）および内皮コロニー形成前駆細胞（ECFCs）を含む、高い増殖能を持つ前駆細胞の豊富な情報源となります。両方の細胞型は、組織の整合性を維持するためのキープレーヤーであり、おそらくまた、再生のプロセスと腫瘍形成に関与している。
比較的にそれらの生物学と機能を研究するためには、同じドナーから入手可能な両方の細胞型を持つことが重要です。また、同じ組織からのMSCsとECFCsを導出するために再生目的のために有益であるかもしれません。
細胞治療は、最終的にベンチからベッドサイドへの道を見つける必要があるので我々は分離する新しい方法を確立し、さらに動物性タンパク質を使用せずに前駆細胞を展開します。プールされたヒト血小板溶解液（pHPLは）完全に異種蛋白質への細胞の接触を避けるために、我々のプロトコルのすべての段階においてウシ胎児血清を取り替えた。
このビデオ一臍帯からの前駆細胞の分離と拡大のための方法論を示しています。
すべての材料および手順について説明する。
Protocol
Discussion
骨髄、脂肪組織、臍帯血、等を含むMSCSまたはECFCsの取得元となる、さまざまなソースがあります
それは、直接組織と血管再生や腫瘍の進行への寄与のようなプロセスでの異なる細胞型の関与を比較するために、同じソースから前駆細胞の両方のタイプを取得する必要があります。
分離し、その後同じドナーからECFCsとMSCの自家ペアを研究する際の容?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、原稿に有益なコメント、ダニエラターレルとマルガレッタ神父hwirth技術支援のための、言語編集用のモニカファレル、ウーラング、マルギットホルツアップフェルと産科の部でサンドラEppichためpHPL、エヴァローデとニコールホフマンを提供するためのカタリーナSchallmoserに感謝コードを提供する。
この作品は、オーストリアの研究財団（FWF、DSへの助成金N211 – NAN）、オーストリアの研究推進機構（FFG、DSへの助成金N200）で、成体幹細胞研究財団（AR）によってサポートされています。 ARは、グラーツの医科大学の博士課程のプログラム分子医学の仲間です。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
Referências
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
