Un système multi-paramétriques Islet périfusion dans un dispositif microfluidique périfusion
Summary
Un dispositif microfluidique périfusion îlot a été développé pour l'évaluation de la sécrétion d'insuline des îlots dynamiques multiples et simultanées imagerie de fluorescence de l'influx de calcium et mitochondrial changements potentiels.
Abstract
Un dispositif microfluidique périfusion îlot a été développé pour l'évaluation de la sécrétion d'insuline des îlots dynamiques multiples et simultanées imagerie de fluorescence de l'influx de calcium et mitochondrial changements potentiels. Le dispositif se compose de trois couches: la première couche contient un tableau de micro-puits (diamètre de 500 um et 150 um de profondeur) qui aident à immobiliser les îlots tandis exposés à des flux et d'optimiser la surface exposée des îlots; la seconde couche contient une circulaire périfusion chambre (3 mm de profondeur, 7 mm de diamètre), et la troisième couche contient un canal d'amenée de mélange que les fans avant injection dans la chambre périfusion (2 mm de largeur, 19 mm de longueur et de 500 um de hauteur) pour optimiser l'efficacité du mélange avant d'entrer dans la chambre périfusion. La création de gradients de glucose différents dont un linéaire, en forme de cloche, et des formes carrées peuvent également être créés dans le réseau périfusion microfluidique et est démontrée.
Protocol
Discussion
Les systèmes traditionnels de périfusion îlots de Langerhans (macroscopique et microscopique) ont quelques limitations, y compris complexes de configuration et de conception, de hautes exigences techniques, et la difficulté de créer l'utilisateur prescrits gradients chimiques dans le système. Le système microfluidique périfusion décrite ici surmonte ces limitations avec une géométrie simple de conception et de fabrication. Plus important encore, ce système peut être intégré à l'approche d'ima…
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par AAUW solidarité internationale au Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) à José Oberholzer, et le projet du diabète de Chicago.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Referências
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
