Mikroakışkan Perifusion Cihaz içindeki Multi-Parametrik Islet Perifusion Sistemi
Summary
Mikroakışkan bir adacık perifusion cihazı, çok sayıda adacık ve kalsiyum girişini ve mitokondriyal potansiyel değişiklikleri eş zamanlı olarak floresan görüntüleme dinamik insülin salgılanması değerlendirilmesi için geliştirilmiştir.
Abstract
Mikroakışkan bir adacık perifusion cihazı, çok sayıda adacık ve kalsiyum girişini ve mitokondriyal potansiyel değişiklikleri eş zamanlı olarak floresan görüntüleme dinamik insülin salgılanması değerlendirilmesi için geliştirilmiştir. Cihaz üç tabakadan oluşur: İlk katman maruz kaldığında, maruz kalan yüzey alanını adacıklar akışı ve en üst düzeye çıkarmak için adacıklar hareketsiz yardımcı microscale kuyular (500 mikron çapında ve 150 mikron derinliğinde) bir dizi içerir; ikinci kat bir genelge içerir perifusion odası (3 mm derinliğinde, 7 mm çapında) ve üçüncü katman bir giriş karıştırma kanal içerdiğini fanlar önce optimize etmek için perifusion odasına enjeksiyon (genişliği 2 mm, 19 mm uzunluğunda, ve yüksekliği 500 mm) karıştırma verimlilik perifusion odasına girmeden önce. Doğrusal bir çan şekli de dahil olmak üzere çeşitli glukoz degradeler, ve kare şekiller oluşturma mikroakışkan perifusion ağı oluşturulacak ve gösterilmiştir.
Protocol
Discussion
Geleneksel adacık perifusion sistemleri (macroscale ve microscale), kurulum ve tasarım, yüksek teknik gereklilikler ve sistem kullanıcı öngörülen kimyasal degradeler oluşturmak için zorluk karmaşık dahil olmak üzere, bazı kısıtlamalar var. Burada açıklanan mikroakışkan perifusion sistemi basit tasarım ve imalat geometri ile bu sınırlamaların üstesinden gelir. Daha da önemlisi, bu sistem adacık fizyoloji çalışmak için benzersiz bir araç olarak sağlayan floresan görüntüleme yaklaşımı…
Acknowledgements
Bu çalışma, Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) Jose Oberholzer ve Chicago Diyabet Proje AAUW uluslararası burs tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Referências
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
