Ensayo experimental de metástasis

Summary

En este artículo se describen los procedimientos de ensayo de metástasis experimental que se utiliza para determinar el potencial metastásico de líneas celulares de cáncer humano.

Abstract

La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Para entender el mecanismo de la metástasis, un ensayo de metástasis experimental se estableció el uso de ratones inmunodeficientes. Este artículo delinea los procedimientos involucrados en este ensayo, incluyendo la preparación de muestras, la inyección intravenosa, y el cultivo de células de metástasis pulmonares. En pocas palabras, un número determinado de células de cáncer humano se prepararon<em> In vitro</em> Y se inyecta directamente en la circulación de ratones inmunodeficientes por las venas de la cola. Un pequeño número de células sobrevivir a la turbulencia en la circulación y crecen como las metástasis en los órganos internos, como el pulmón. Los ratones inyectados se diseccionan después de un período determinado. La distribución en los tejidos de las metástasis se determina bajo un microscopio de disección. El número de metástasis en un tejido específico se cuenta y se correlaciona directamente con la capacidad metastásica de las células cancerosas inyectadas. La metástasis surgido son aisladas y cultivadas<em> In vitro</em> Como líneas celulares, que a menudo muestran una mayor capacidad metastásica de la línea de los padres cuando se inyecta de nuevo en ratones inmunodeficientes. Estos derivados altamente metastásico convertirse en herramientas útiles para la identificación de genes o de las vías moleculares que regulan la progresión metastásica.

Protocol

1. Preparación de la muestra Se cultivan las células confluentes a ~ 70% en sus medios de comunicación específicos con factores de crecimiento o FBS (por ejemplo, DMEM con FBS al 10% de MC-1 en las células). Aspirar los medios de comunicación de la placa y lavar suavemente varias veces con 1 x PBS (8 g / l de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspirar PBS y añadir 2 ml de tripsina 0…

Discussion

La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Se trata de cuatro pasos principales: el desprendimiento de las células cancerosas de sus lugares principales, su entrada en circulación (intravasation), su salida de la circulación (extravasación), y la supervivencia y el crecimiento en un órgano distante. Metástasis en humanos se considera un proceso lento y muchas veces se manifiesta después de varios años de latencia. Para el estudio de su progresión en el momento oportuno, el ensayo a…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Invitrogen	10313-021
FBS		Hyclone	SH30088.03
HBSS		Invitrogen	14175-095
NaCl		Sigma-Aldrich	S9888
KCl		Mallinckrodt Chemicals	6838-04
Na2 HPO4.7H2O		Mallinckrodt Chemicals	7896-04
KH2PO4		Mallinckrodt Chemicals	7100-12
Phenol red		Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na		EMD Biosciences	4010
Trypan Blue		Invitrogen	15250-061
Trypsin 2.5%		Invitrogen	15090-046
Ethanol		Ultrapure	200-CSGP
50 ml Falcon Tube		VWR	89039-656
Microcentrifuge Tubes		Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70µm Cell Strainer		BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube		VWR	60818-576
Hemacytometer		Hausser Scientific	15170-208
1 ml syringe		BD Biosciences	329650
30 ½ gauge needle		BD Biosciences	305106
Mouse restrainer		Plas Labs Inc.	551-BSRR
Surgical scissors		Fisher Scientific	08-940
Forceps		Fisher Scientific	08-902
Dissecting Microscope		Nikon	SMZ1500
Benchtop Centrifuge		Thermoscientific	75003491