Deneysel metastaz Testi
Summary
Bu makale, insan kanser hücre hatları metastatik potansiyelini belirlemek için kullanılan deneysel bir metastaz testinin prosedürleri açıklamaktadır.
Abstract
Metastaz, kanser hastalarının ölüm önde gelen nedenidir. Metastaz mekanizmasını anlamak için, deneysel bir metastaz tahlil bağışık yetmezliği olan farelere kullanılarak kurulmuştur. Bu makale, numune hazırlama, intravenöz enjeksiyon ve akciğer metastaz hücreleri kültür de dahil olmak üzere, bu testte yer alan usul çizmektedir. Kısaca, insan kanser hücreleri önceden belirlenmiş bir sayı hazırlanmıştır.<em> In vitro</em> Ve doğrudan dolaşıma kuyruk damarları aracılığıyla bağışık yetmezliği olan farelere enjekte edildi. Küçük bir hücre sayısı dolaşımda türbülans gibi akciğer gibi iç organlarda metastaz olarak hayatta kalmak ve büyümek. Enjekte edilen farelerin belirli bir süre sonra disseke edilir. Diseksiyon mikroskobu altında metastaz doku dağılımı belirlenir. Belirli bir doku metastaz sayısı ve enjekte edilen kanser hücrelerinin metastatik yeteneği ile doğrudan ilişkilidir. Ortaya metastaz izole ve kültür<em> In vitro</em> Olarak, bağışık yetmezliği olan farelere tekrar enjekte çoğu ebeveyn hat daha gelişmiş metastatik yetenekleri hücre hatları. Bu son derece metastatik türevleri metastatik ilerlemesi düzenleyen genleri veya moleküler yollar tanımlamak için yararlı araçlar haline gelir.
Protocol
Discussion
Metastaz, kanser hastalarının ölüm önde gelen nedenidir. Birincil lokusların, dolaşıma giriş (intravasation), dolaşım (ekstravazasyonu) çıkış, ve uzak bir organ hayatta kalma ve büyüme kanser hücrelerinin ayrılması: Bu dört ana adımdan oluşur. Insan metastaz yavaş bir süreç olarak görülür ve genellikle gecikme yıl sonra tezahür eder. Zamanında ilerlemesi çalışma için, yukarıdaki nispeten hızlı deneysel assay bağışık yetmezliği olan farelere kurulmuştur 4 Kurulduğu…
Acknowledgements
Bu protokol, test edilmiş ve Dr. Richard Hynes (MIT) laboratuvar başlangıçta optimize edilmiştir. Finansman NYSTEM FİKİR ÖDÜLÜ (LX) ve Ruth L. Kirschstein Ulusal Araştırma Hizmet Ödülü (LX) tarafından sağlanmaktadır.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | ||
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | ||
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | ||
| KCl | Mallinckrodt Chemicals | 6838-04 | ||
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Chemicals | 7896-04 | ||
| KH2PO4 | Mallinckrodt Chemicals | 7100-12 | ||
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | ||
| EDTA-Na | EMD Biosciences | 4010 | ||
| Trypan Blue | Invitrogen | 15250-061 | ||
| Trypsin 2.5% | Invitrogen | 15090-046 | ||
| Ethanol | Ultrapure | 200-CSGP | ||
| 50 ml Falcon Tube | VWR | 89039-656 | ||
| Microcentrifuge Tubes | Axygen Scientific | MCT-175-C | ||
| Falcon 70µm Cell Strainer | BD Biosciences | 352350 | ||
| 5ml Falcon Culture Tube | VWR | 60818-576 | ||
| Hemacytometer | Hausser Scientific | 15170-208 | ||
| 1 ml syringe | BD Biosciences | 329650 | ||
| 30 ½ gauge needle | BD Biosciences | 305106 | ||
| Mouse restrainer | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | ||
| Surgical scissors | Fisher Scientific | 08-940 | ||
| Forceps | Fisher Scientific | 08-902 | ||
| Dissecting Microscope | Nikon | SMZ1500 | ||
| Benchtop Centrifuge | Thermoscientific | 75003491 |
Referências
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC. Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).
- Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).
- Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice. J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).
- Kang, Y. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).
