إنشاء الابتدائية الثقافات الليفية الكبار من القوارض
Summary
توضح هذه المقالة بروتوكول للعزلة وصيانة الثقافات الليفية الأولية من الجلد وأنسجة الرئة من القوارض البرية.
Abstract
أهمية استخدام الخلايا الأولية ، بدلا من خطوط الخلايا السرطانية ، للدراسات البيولوجية أصبح من المسلم به على نطاق واسع. ويفضل الخلايا الأولية في دراسات الخلايا دورة الخلية ، والسيطرة ، وإصلاح الحمض النووي ، كما الخلايا السرطانية تحمل طفرات في الجينات المسؤولة عن هذه العمليات. لا يمكن أن يكون مثقف الخلايا الأولية اجل غير مسمى بسبب ظهور الشيخوخة أو تنسخي aneuploidization. وبالتالي ، ثقافات جديدة تدعو الحاجة إلى وضع بانتظام. راسخة الإجراء لعزل الخلايا الليفية القوارض الجنينية ، ولكن عزل الثقافات الليفية الكبار غالبا ما يقدم تحديا. قد الليفية القوارض الكبار معزولة عن نماذج الماوس من الأمراض التي تصيب الإنسان تكون السيطرة المفضل عند مقارنتها الليفية من المرضى من البشر. علاوة على ذلك ، لا أخلاقي الليفية هي المادة الوحيدة المتاحة عند العمل مع القوارض البرية التي لا يمكن فيها الإناث الحوامل يمكن الحصول عليها بسهولة. هنا نقدم بروتوكول للعزلة وثقافة الليفية الكبار من القوارض الجلد والرئتين. استخدمنا هذا الإجراء بنجاح لعزل الخلايا الليفية من أكثر أنواع القوارض العشرين من الفئران والجرذان المختبرية على القوارض البرية مثل القندس ، النيص ، والسنجاب.
Protocol
Discussion
الليفية الأولية الطبيعية تقدم بديلا ممتازا لإنشاء خطوط الخلايا السرطانية في مجال البحوث البيولوجية. ميزة هامة من الخلايا الليفية هو أنها لا تحمل طفرات في الجينات المسرطنة والمكثفات ورم سليمة والحفاظ على نقاط التفتيش دورة الخلية. وهذا يجعل الخلايا الليفية العادي يف…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر الدكتور ستيفن Austad لتزويدنا النسخة الأولى من هذا البروتوكول. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة والمؤسسة الطبية لVG إليسون وAS
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM/F12 media | Invitrogen | 11330-032 | ||
| Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified | Invitrogen | 01437-036 | The Qualified serum had been pre-tested to provide good growth support for primary fibroblasts. | |
| Antibiotic/Antimycotic | Invitrogen | 15420-096 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Liberase TM Research Grade | Roche | 05401127001 | Replacement enzyme. | |
| A note from the authors: Since Roche discontinued Liberase Blendzyme 3 (11814184001), they recommend using Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (Cat. no. 05401119001 – 10 mg, Cat. no. 05401127001 – 100mg) instead. We have switched to this enzyme successfully with no issues. | ||||
| EMEM media | ATCC | 30-203 | The EMEM media from ATCC already contains nonessential amino acids and sodium pyruvate. | |
| Feathered #21 disposable, sterile scalpel | Multiple suppliers | |||
| Three Gas Control incubator | Forma or Heraeus |
Referências
- Seluanov, A. Distinct tumor suppressor mechanisms evolve in rodent species that differ in size and lifespan. Aging . Cell. 7, 813-823 (2008).
- Parrinello, S. Oxygen sensitivity severely limits the replicative lifespan of murine fibroblasts. Nat Cell Biol. 5, 741-747 (2003).
