げっ歯類からプライマリ大人の線維芽細胞培養の確立
Summary
この記事では野生のげっ歯類の皮膚および肺組織からの初代線維芽細胞培養物の分離および保守のためのプロトコルについて説明します。
Abstract
生物学的研究のために、初代培養細胞ではなく癌細胞株を使用することの重要性は広く認識になりつつあります。がん細胞は、これらのプロセスに関与する遺伝子の変異を運ぶように主細胞は、細胞周期の制御、アポトーシス、およびDNA修復の研究で好まれている。初代細胞は無限に複製老化または異数性発現の発現のために培養することができません。したがって、新しい文化は、定期的に確立する必要があります。齧歯類の胚性線維芽細胞の単離のための手順は十分に確立されているが、成人線維芽細胞培養を単離することはしばしば課題となっています。ヒトの患者から線維芽細胞にそれらを比較するときに、ヒト疾患のモデルマウスから分離された成体げっ歯類の繊維芽細胞は、優先制御があります。妊娠中の女性を容易に得ることができない野生のげっ歯類を操作するときまた、成人線維芽細胞でのみ利用可能な材料です。ここでは、げっ歯類の皮膚や肺から成人線維芽細胞の単離および培養のためのプロトコルを提供しています。我々は、実験用マウスおよびラットからそのようなビーバー、ヤマアラシ、やリスなどの野生げっ歯類20種のげっ歯類上から線維芽細胞を分離するためにこのプロシージャを正常に使用する。
Protocol
Discussion
通常の主な線維芽細胞は、生物学の研究で確立された癌細胞株に対する優れた代替手段を提供しています。線維芽細胞の重要な利点は、彼らが癌遺伝子および腫瘍抑制遺伝子の変異を運ぶし、無傷の細胞周期チェックポイントを維持していないということです。これは正常な線維芽細胞周期調節、DNA修復、およびアポトーシスの研究に適したシステムです。ここで説明するプロトコルは?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、このプロトコルの最初のバージョンをご提供するためスティーブンAustadに感謝。この作品は、NIHとエリソン医学財団からVGへの補助金によってと同様にサポートされて
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM/F12 media | Invitrogen | 11330-032 | ||
| Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified | Invitrogen | 01437-036 | The Qualified serum had been pre-tested to provide good growth support for primary fibroblasts. | |
| Antibiotic/Antimycotic | Invitrogen | 15420-096 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Liberase TM Research Grade | Roche | 05401127001 | Replacement enzyme. | |
| A note from the authors: Since Roche discontinued Liberase Blendzyme 3 (11814184001), they recommend using Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (Cat. no. 05401119001 – 10 mg, Cat. no. 05401127001 – 100mg) instead. We have switched to this enzyme successfully with no issues. | ||||
| EMEM media | ATCC | 30-203 | The EMEM media from ATCC already contains nonessential amino acids and sodium pyruvate. | |
| Feathered #21 disposable, sterile scalpel | Multiple suppliers | |||
| Three Gas Control incubator | Forma or Heraeus |
Referências
- Seluanov, A. Distinct tumor suppressor mechanisms evolve in rodent species that differ in size and lifespan. Aging . Cell. 7, 813-823 (2008).
- Parrinello, S. Oxygen sensitivity severely limits the replicative lifespan of murine fibroblasts. Nat Cell Biol. 5, 741-747 (2003).
