El mantenimiento de Wolbachia en medio libre de células

Summary

Este video describe un método para la purificación de Wolbachia pipientis de una línea celular Anopheles gambiae y el cultivo de la endosimbionte en medio libre de células. Un ensayo de viabilidad de la bacteria se demuestra.

Abstract

En este protocolo de vídeo, los procedimientos se demuestra que (1) purificar simbiontes Wolbachia fuera de las células cultivadas de mosquitos, (2) utilizar un ensayo fluorescente para determinar la viabilidad de la Wolbachia purificada y (3) mantener la Wolbachia ahora extracelular en el medio libre de células . Purificada Wolbachia permanecen vivos en la fase extracelular, pero no se replican hasta que re-inoculados en células eucariotas. Wolbachia extracelular purificado de esta manera permanecer viables por lo menos una semana a temperatura ambiente, y posiblemente más. Purificada Wolbachia son adecuados para la microinyección, la extracción de ADN y otras aplicaciones.