Yoğun çalışılan bir nematod solucanı<em> Caenorhabditis elegans</em> Transgenically insan β-amiloid peptid (Aβ) ifade etmek için tasarlanmış olabilir. Aβ, İndüklenmiş ifade<em> C. elegans</em> Kas hızlı, tekrarlanabilir felç fenotip Aβ toksisite modüle tedavileri izlemek için kullanılabilecek bir yol açar.
Β-amiloid peptid (Aβ) birikmesi genellikle Alzheimer hastalığının indüksiyon merkezi inanıyordu, ancak ilgili toksisite mekanizma (lar) hala belirsiz. Aβ da İçerme Vücut Miyozit, ciddi bir insan miyopati intramüsküler yatırılır. Yoğun çalışılan nematod solucan Caenorhabditis elegans transgenically insan Aβ ifade etmek için tasarlanmış olabilir. Aβ ifade doku ya da zamanlama olarak, transgenik solucanlar Aβ toksisite okuma olarak hizmet kolaylıkla ölçülebilir fenotipleri olabilir. Cohen ve ark; Örneğin, Pan-nöronal Aβ ifade ile transgenik solucanlar kurucu kas-özel ifadesi ile transgenik solucanlar ilerici, yaşa bağlı felç fenotip (Link, 1995, kusurlar, ilişkisel öğrenme (. Dosanjh ve ark 2009) 2006). Bir özellikle yararlı C. elegans modeli, tekrarlanabilir bir felç fenotip sıcaklık upshift (Link ve ark 2003) üzerine çıkan bir Aβ transgen sıcaklık indüklenebilir kas ifade mühendisi mRNA gözetim sistemi ısıya duyarlı bir mutasyon istihdam. Bu modelde karşı Aβ toksisite [örneğin, bir koruyucu transgen (Hassan ve ark 2009) ifade Ginkgo biloba ekstreleri (Wu ve ark 2006) maruz kalma] tekrarlanabilir bu transgenik sıcaklık upshift tarafından tetiklenen felç oranı değiştiren tedaviler solucanlar. İşte biz bu transgenik C. felç oranı ölçmek için bizim protokol tarif Bu ölçüm etkisi deneysel değişkenlerin özellikle dikkat elegans modeli.
Açıklanan protokol etkili Aβ toksisite bileşiklerin etkilerini tahlil etmek için kullanılabilir. Yayınlandı örnekler Ginkgo biloba ekstresi bileşenlerinin etkileri (Wu ve ark 2006) ve reserpin (Arya ve ark 2009) içerir. Diğer sistemlerde Aβ toksisitesine karşı koruyucu bileşikler de (örneğin, memantin, yayımlanmamış sonuçlar) bu modelde koruyucu olduğu gösterilmiştir. Bu modelin kurulması için önemli bir gerekçe C ile iyi geliştirilmiş genetik ve moleküler araçlar kullanılabilir. elegans Aβ toksisite mekanizmaları araştırmak için kullanılabilir. Böylece, Aβ toksisitesi üzerindeki etkileri özel mutasyonlar (örneğin, daf-2-fonksiyon kaybı mutasyonu, Florez-McClure ve ark, 2007 tanıtan tarafından sinyalizasyon gibi insülin azaltmada etkisi) test ve bu model de olabilir (Fonte ve ark 2008) aşırı ifade transgenlerin etkilerini incelemek için kullanılır. Biz son zamanlarda Aβ tek bir amino asit değiştirmelerin (yayınlanmamış veri) toksisitesi üzerindeki etkilerini incelemek için bu modelin geniş kullanımı yaptık.
Transgenik bir model deneyleri burada kas hücre fonksiyonu akut Aβ ifade etkisi nitelendirdi. Felç kas hücreleri ve bunların sarkomer zamanda bozulmamış; felç fenotip kas hücre ölümü sonucu değildir. Ancak, kas bütünlüğünü ve solucanlar nihai ölümünden sonra felç (ilk upshift sonra ~ 48 saat) bir arıza var. Biz bu Aβ ifade aşağı etkisi araştırılmıştır veya bir toksisite belirteci olarak kullanılır.
Burada açıklanan indüklenebilir Aβ ifade modeli başına β-amiloid oluşumunu modüle tedavileri araştırmak için uygun değildir. (. Fay ve ark 1998; Link ve ark 2001) kurucu Aβ ifade formu kolaylıkla saptanabilir amiloid mevduat transgenik solucanlar rağmen, indüklenebilir Aβ ifade ile transgenik solucanlar nadiren amiloid mevduat ve felç fenotip amiloid birikimi (Drake ve ark bağımsız görünür. 2003). Çözünen oligomerik Aβ birikimi değil, amiloid birikimi bağlı Aβ ifade sonuçlarının akut toksisite sonuçları görünümü ile uyumlu.
The authors have nothing to disclose.
Biz protokolleri geliştirmeye yardımcı oldu, özellikle de burada özgün yordamı geliştirmiştir Cin Fonte açıklanan Link laboratuarı mevcut ve eski üyeleri teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma CDL NIH (AG12423) ve Alzheimer Derneği (Zenith Ödülü) ödül tarafından desteklenmektedir
Reagents | Quantity/2L | Company/Catalogue # | Comments |
NaCl | 6g | Sigma-Aldrich / S9888 | |
Agar | 40g | Sigma-Aldrich / A7002 | |
Peptone | 5g | Sigma-Aldrich / P0556 | |
ddH2O | 2L | ||
1M CaCl2 | 2mL | 147.02mg/mL in ddH2O | |
Uracil | 2mL | 2mg/mL in ddH2O | |
Cholesterol | 2mL | 5mg/mL in ethanol (do not autoclave) | |
1M MgSO4 | 2mL | 246.5mg/mL in ddH2O | |
1M KPO4 | 50mL | 98mg KH2PO4.mL, 48mg K2HPO4/mL in ddH2O, pH | |
Erlenmeyer Flask | VWR |