Culture ex vivo des tissus du patient et l'examen de la livraison de gènes
Summary
Cet article décrit la culture de tranches de tissu du patient pour les études de livraison de gènes et l'analyse ultérieure de l'expression des gènes en utilisant l'imagerie par bioluminescence IVIS.
Abstract
Cette vidéo décrit l'utilisation de tissus du patient comme un modèle ex vivo pour l'étude du transfert de gènes. Les tissus du patient fraîche obtenue au moment de la chirurgie est tranché et maintenues en culture. Le système ex vivo modèle permet pour la livraison physique des gènes dans les tissus du patient intact et l'expression des gènes est analysée par imagerie par bioluminescence en utilisant le système de détection IVIS. Le système de détection bioluminescente démontre la quantification rapide et précise de l'expression des gènes au sein des tranches individuelles sans avoir besoin de sacrifier des tissus. Ce système de culture coupe de tissu peut être utilisé dans une variété de types de tissus, y compris les tissus normaux et malins et nous permet d'étudier les effets de la nature hétérogène du tissu intact et le haut degré de variabilité entre les patients individuels. Ce système modèle pourrait être utilisé dans certaines situations comme une alternative aux modèles animaux et comme un mode complémentaire précliniques avant d'entrer dans l'essai clinique.
Protocol
Discussion
Nous décrivons un patient ex vivo la culture de tissus méthode et système de détection de bioluminescence pour l'évaluation du transfert de gènes au sein non fixe les tissus humains. La méthode offre un moyen simple et reproductible des tranches de tissu en culture. Il a un potentiel important car il permet l'étude de la livraison de gènes dans les tissus humains intact, l'analyse de la livraison de gènes dans une variété de tissus humains, y compris les tissus malins et peut fournir des…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé par le Cork South Victoria Infirmary Hospital de l'Université de fonds du sein, cancer de la Société irlandaise (CRI07TAN) et le Centre de recherche contre le cancer Cork. Réplication incompétents adénovirus recombinant 5 particules sous le contrôle transcriptionnel du promoteur du CMV a été un cadeau aimable du professeur Andrew Baker, Université de Glasgow.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | ||
| Firefly Luciferin | Biosynth, Switzerland | |||
| Dermabond | Johnson & Johnson | |||
| Vibrotome | Leica microsystems | VT 1000 A |
Referências
- van de Bovenkamp, M., Groothuis, G. M., Draaisma, A. L., Merema, M. T., Bezuijen, J. I., van Gils, M. J. Precision-cut liver slices as a new model to study toxicity-induced hepatic stellate cell activation in a physiologic milieu. Toxicol Sci. 85, 632-638 (2005).
- Speirs, V., Green, A. R., Walton, D. S., Kerin, M. J., Fox, J. N., Carleton, P. J. Short-term primary culture of epithelial cells derived from human breast tumours. Br J Cancer. 78, 1421-1429 (1998).
- Kirby, T. O., Rivera, A., Rein, D., Wang, M., Ulasov, I., Breidenbach, M. A novel ex vivo model system for evaluation of conditionally replicative adenoviruses therapeutic efficacy and toxicity. Clin Cancer Res. 10, 8697-8703 (2004).
- Josserand, V., Texier-Nogues, I., Huber, P., Favrot, M. C., Coll, J. L. Non-invasive in vivo optical imaging of the lacZ and luc gene expression in mice. Gene Ther. 14, 1587-1593 (2007).
