Amaxa Nucleofector과 인간 신경 줄기 세포를 Transfecting
Summary
셀에 관심 유전자를 소개하면 생체내 년에 기능을 elucidating위한 강력한 방법입니다. 이 프로토콜은 Amaxa 만든 Nucleofector electroporation 장치를 사용하여 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)의 문화를 transfecting의 효율적인 방법을 설명합니다.
Abstract
이러한 일반적으로 사용되는 양이온 지질 transfection의 시약과 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)로 기본 포유류의 신경 세포의 Transfection은 종종 가난한 세포 생존 능력과 낮은 transfection 효율 결과입니다. 이러한 유전자 총을 또는 microinjection 같은 관심의 유전자를, 도입의 다른 기계적 방식은 또한 가난한 세포 생존과 transfected 세포의 낮은 숫자로 제한됩니다. 기본 세포로 외인성 유전자를 도입 바이러스 구조를 사용하는 전략은 바이러스 벡터 및 잠재적인 안전 문제를 만드는 데 필요한 시간의 금액과 노동 모두에 의해 제약되었습니다. 우리는 여기서 특별히 신경 줄기 세포를 transfecting에 최적화된 전류 매개 변수 및 버퍼 솔루션으로 Amaxa의 Nucleofector 장치와 기술을 사용하여 hNSPCs을 transfecting위한 단계별 절차를 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 ~ 35 %의 초기 transfection 효율을 달성하고 안정적인 transfection 후 70 % ~했습니다. 프로토콜은 장치와 함께 Nucleofector electroporation 다음 해당 버퍼에 transfected하는 DNA와 hNSPCs 높은 숫자를 결합 알아볼 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 프로토콜은 hNSPCs에 대해 상대적으로 신속하고 효율적인 transfection 절차를 설명합니다. 이 절차를 사용하여, 우리는 ~ 35 %의 초기 transfection 효율을 획득했습니다. 선택 에이전트가 안정 transfected 인구를 생성하는 데 사용되는 경우에는이 절차에 의해 transfected 세포 단기 연구 (transiently transfected 세포) 또는 장기적인 연구에 사용될 수 있습니다. 우리는 외인성 단백질을 표현하는 세포의 70 %를 ~하는 안정 transfected…
Acknowledgements
저자는 어린이의 병원, hNSPC 문화를 제공하는 오렌지 카운티 연구소 국립 인간 신경 줄기 세포 자원의 박사 필립 H. 슈워츠을 인정하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| The Nucleofector Device | Tool | Amaxa | AAD-1001 | |
| Mouse neural stem cell nucleofector kit | Reagent | Amaxa | VPG-1004 |
Referências
- Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. New non-viral method for gene transfer into primary cells. Methods. 33, 151-163 (2004).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Counting Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
