用荧光素酶在小鼠细菌性感染的形象
Summary
生物发光细菌感染在动物活体成像的方法进行了阐述。病原体被修改，以表达荧光素酶，使光全身显像在活的动物感染。荧光素酶表达的病原体可感染动物模型和疾病过程中产生的生物发光成像在实时可视化。
Abstract
成像是一种有价值的技术，可以用来监测生物过程。特别是肿瘤细胞，干细胞，特定的免疫细胞类型，病毒性病原体，寄生虫和细菌的存在可以实时在动物活体1-2遵循。应用生物发光成像研究的病原体相比，传统的战略分析感染动物模型3-4的优势。感染可可视范围内的动物个体随着时间的推移，不要求安乐死，以确定病原体的位置和数量。光学成像允许所有组织和器官进行全面检查，而不是以前已知的被感染的网站取样。此外，接种到特定组织中的准确性，可以直接决定之前进行，整个实验失败向前动物接种。控制动物之间的可变性，因为成像允许每个动物应遵循个别。成像有可能大大减少，因为能够获得大量的时间点的数据，而无需组织样本，以确定病原体负荷3-4动物数量需要。
该协议描述的方法来可视化重组菌株表达荧光素酶的细菌的生物发光成像在活的动物感染。单击甲虫（CBRLuc）和萤火虫荧光素酶（FFluc）利用荧光素作为基材5-6。 CBRluc和FFluc产生的光有一个宽的波长从500纳米到700纳米，使得这些荧光素酶在活的动物模型7-9的光学成像的优秀记者。这主要是因为波长大于600纳米的光，以避免被血红蛋白吸收，因此，通过有效旅行哺乳动物组织。荧光素酶基因引入细菌产生的光信号10。小鼠接种发光细菌气管允许监测实时感染肺。荧光素注射后，使用IVIS成像系统的图像采集。在成像过程中，小鼠与使用XGI – 8气体Anethesia系统异氟醚麻醉。可以将图像分析，本地化和量化的信号源，代表细菌感染的网站（S）和数量，分别。后成像，CFU决心进行匀浆组织，以确认细菌的存在。几个剂量的细菌用于关联发光细菌数量。可应用于成像的发病机制和抗菌化合物和疫苗的疗效评价研究。
Protocol
Discussion
尽管这些协议通常会导致在高品质的图像，重要的是要考虑的几个关键问题，以便获得准确和一致的数据，影像学检查。应收购，从600到60,000个计数，以确保信号是上述背景及相机不饱和发光图像。如果信号获得低于600，曝光条件下，应调整增加计数。如果信号获得超过60,000相机在一些地区已经饱和。当相机饱和，量化不应该尝试在饱和的地区，但它仍然有可能在非饱和的地区，有时必要。此外?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者感谢整个研究的有价值的讨论和援助奇里洛实验室成员。我们感谢约书亚 – 希尔博士的詹姆斯博士的援助塞缪尔实验室，在本议定书的拍摄。这项工作是由比尔和梅林达盖茨基金会和来自美国国立卫生研究院授予AI47866授予48523。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | VETONE | 501027 | ||
| Ketamine | Butler animal health supply | |||
| Xylazine | MP Biomedical | 158307 | ||
| Luciferin | GMT | LUCK-100 | ||
| Fetal plus solution | VOR tech pharmaceutical | |||
| Cathether (22G x 1”) | TERUMO | OX2225CA | ||
| Guide wire | Hallowell EMC | 210A3491 | ||
| Octocope with speculum | Hallowell EMC | 000A3748 | ||
| Xenogen IVIS system | Caliper Life Sciences | |||
| XGI-8-gas Anesthsia System | Caliper Life Sciences | |||
| Living Imaging Software | Caliper Life Sciences | |||
| Transparent nose cones | Caliper Life Sciences | |||
| Light baffle divider | Caliper Life Sciences |
Referências
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