Einer mikrofluidischen Vorrichtung mit Groove Patterns für ein Studium Cellular Behavior
Summary
Wir beschreiben ein Protokoll für die Herstellung von mikrofluidischen Bauteilen, die Zelle zu erfassen und Kultur ermöglichen können. In diesem Ansatz gemusterten Mikrostrukturen wie Rillen in mikrofluidischen Kanälen werden verwendet, um Scherarmut Regionen, in denen Zellen andocken können erstellen.
Abstract
Wir beschreiben ein Mikrofluidiksystem mit microgrooved Muster für die Untersuchung zellulärer Verhalten. Diese mikrofluidischen Plattform besteht aus einem Oberteil Fluidikkanal und eine untere microgrooved Substrat. Zur Herstellung der microgrooved Kanäle, war ein Top-Poly (dimethylsiloxan) (PDMS) Form mit dem Eindruck der mikrofluidischen Kanälen ausgerichtet und verbunden mit einem microgrooved Substrat. Mit diesem Gerät, Maus-Fibroblasten-Zellen wurden fixiert und strukturiert innerhalb microgrooved Substrate (25, 50, 75 und 100 &mgr; m breit). Um die Apoptose in einer mikrofluidischen Vorrichtung Studie wurde Medium mit Wasserstoffperoxid, Annexin V und Propidiumiodid in die Fluidik-Kanal für 2 Stunden perfundiert. Wir fanden, dass Zellen, die den oxidativen Stress apoptotischen wurde. Diese apoptotischen Zellen wurden durch Annexin V bestätigt, dass an Phosphatidylserin an der äußeren Seite der Plasmamembran während der Apoptose-Prozess gebunden. Mit diesem mikrofluidischen Gerät mit microgrooved Muster wurde die Apoptose-Prozess in Echtzeit beobachtet und analysiert mit Hilfe eines inversen Mikroskops mit einer Inkubationszeit Kammer (37 ° C, 5% CO 2). Daher könnte dieses Mikrofluidiksystem mit microgrooved Substrate eingearbeitet werden für die Untersuchung der zellulären Verhaltens und Durchführung von Hochdurchsatz-Wirkstoffsuche.
Protocol
Discussion
Die Zellen wurden fixiert und strukturiert innerhalb microgrooved Substrate in einer mikrofluidischen Vorrichtung. Die Apoptose-Prozess von Zellen, die Wasserstoffperoxid in Echtzeit beobachtet und analysiert mit Annexin V und Propidiumiodid. So könnte dieses Mikrofluidiksystem mit microgroove Kanäle nützlich sein für das Hochdurchsatz-Wirkstoffsuche.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Reagent | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) |
| DMEM | medium | Invitrogen | 11965 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Media |
| FBS | serum | Invitrogen | 10082-147 | Fetal Bovine Serum |
| Hydrogen peroxide | Reagent | Sigma Aldrich | H1009 | |
| Apoptosis assay | Invitrogen | V13242 | Annexin A, propidium iodide | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 2015 | ||
| Si wafer | Tool | 4 inch silicone wafer | ||
| Reactive oxygen plasma | Reagent | Harrick Scientific | treat wafer 5 min at 30W | |
| inverted microscope | Tool | Nikon | TE 2000 |
Referências
- Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform. BMC Biotechnol. 7, (2007).
- Khademhosseini, A., Yeh, J., Eng, G., Karp, J., Kaji, H., Borenstein, J., Farokhzad, O. C., Langer, R. Cell docking inside microwells within reversibly sealed microfluidic channels for fabricating multiphenotype cell arrays. Lab Chip. 5, 1380-1386 (2005).
- Whittemore, E. R., Loo, D. T., Watt, J. A., Cotman, C. W. A detailed analysis of hydrogen peroxide-induced cell death in primary neuronal culture. Neurociência. 67, 921-932 (1995).
