Микрожидкостных устройств с Groove Шаблоны для изучения Сотовая Поведение
Summary
Мы опишем протокол для изготовления микрожидкостных устройств, которые могут позволить захват клеток и культуры. При таком подходе узорной микроструктур, таких как пазы внутри микрожидкостных каналов используются для создания низкого напряжения сдвига регионов, в которых клетка может дока.
Abstract
Мы описываем микрожидкостных устройств с microgrooved моделей для изучения сотовой поведения. Это микрожидкостных платформа состоит из верхней жидкостный канал и нижней microgrooved подложки. Для изготовления microgrooved каналов, топ поли (диметилсилоксана) (PDMS) плесень содержащие впечатление микрожидкостных каналов, был согласован и связан с microgrooved подложки. С помощью этого устройства, клеток фибробластов мыши не могли двигаться и рисунком в microgrooved субстраты (25, 50, 75 и 100 мкм в ширину). Для изучения апоптоза в микрожидкостных устройств, сред, содержащих перекись водорода, Аннексин V, и пропидий иодида перфузии в жидкостный канал на 2 часа. Мы обнаружили, что клетки подвергаются окислительному стрессу стал апоптоза. Эти апоптотических клеток были подтверждены Аннексин V которая привязана к фосфатидилсерина в наружный листок из плазматической мембраны в процессе апоптоза процесса. С помощью этого устройства с микрожидкостных microgrooved узоры, апоптоз процесс наблюдался в режиме реального времени и проанализированы с помощью инвертированного микроскопа, содержащая камеру инкубации (37 ° C, 5% СО 2). Таким образом, этот микрожидкостных устройство, установленное с microgrooved подложки могут быть полезны для изучения клеточного поведения и выполнения высокой пропускной скрининга препаратов.
Protocol
Discussion
Клетки иммобилизованных и рисунком в microgrooved субстратов в микрожидкостных устройств. Процесс апоптоза клеток воздействию перекиси водорода наблюдалось в реальном времени и проанализированы с помощью Аннексин V и пропидий йодида. Таким образом, это устройство, содержащее микрожидкостных микрока…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Reagent | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) |
| DMEM | medium | Invitrogen | 11965 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Media |
| FBS | serum | Invitrogen | 10082-147 | Fetal Bovine Serum |
| Hydrogen peroxide | Reagent | Sigma Aldrich | H1009 | |
| Apoptosis assay | Invitrogen | V13242 | Annexin A, propidium iodide | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 2015 | ||
| Si wafer | Tool | 4 inch silicone wafer | ||
| Reactive oxygen plasma | Reagent | Harrick Scientific | treat wafer 5 min at 30W | |
| inverted microscope | Tool | Nikon | TE 2000 |
Referências
- Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform. BMC Biotechnol. 7, (2007).
- Khademhosseini, A., Yeh, J., Eng, G., Karp, J., Kaji, H., Borenstein, J., Farokhzad, O. C., Langer, R. Cell docking inside microwells within reversibly sealed microfluidic channels for fabricating multiphenotype cell arrays. Lab Chip. 5, 1380-1386 (2005).
- Whittemore, E. R., Loo, D. T., Watt, J. A., Cotman, C. W. A detailed analysis of hydrogen peroxide-induced cell death in primary neuronal culture. Neurociência. 67, 921-932 (1995).
