Trapianto mammaria di cellule stromali e cellule di carcinoma in topi C57BL/6J
Summary
In questo rapporto, si dimostra un sistema per isolare la cultura e le cellule del donatore dalla ghiandola mammaria del mouse, e ortotopicamente trapianto di queste cellule in topi riceventi per analizzare stromali: interazioni epiteliali durante lo sviluppo del tumore mammario.
Abstract
L'influenza delle cellule stromali, inclusi i fibroblasti sulla progressione del tumore mammario è stato ben documentato attraverso l'utilizzo di modelli murini, in particolare attraverso il trapianto di cellule stromali e le cellule epiteliali della ghiandola mammaria di topo. Modelli trapianto attuali che prevedono l'utilizzo di topi immunocompromessi a causa della diversa provenienza genetica delle cellule stromali e cellule epiteliali. Matrici extracellulari sono spesso utilizzati per incorporare i due tipi di cellule diverse per coerenza interazioni cellula-cellula, ma implicano l'uso di Matrigel o collagene coda di ratto, che sono substrati immunogenico. La mancanza di funzionalità delle cellule T di topi immunocompromessi impedisce una valutazione accurata delle cellule stromali sulla progressione del tumore della mammella in vivo, con importanti implicazioni sullo sviluppo di farmaci e l'efficacia. Inoltre, i topi immunocompromessi sono costosi, difficili da allevare e richiedono condizioni di particolare attenzione. Per superare questi ostacoli, abbiamo sviluppato un approccio alla ortotopicamente trapianto di cellule stromali e le cellule epiteliali in topi dallo sfondo stesso genetico di indurre la formazione costante del tumore. Questo sistema prevede la raccolta normale, carcinoma fibroblasti associati, PyVmT cellule di carcinoma mammario e del collagene da donatore topi C57BL/6J. Le cellule sono poi integrati nel collagene e trapiantati nelle ghiandole inguinali mammaria di topo femmina C57BL/6J. Il trapianto di cellule PyVmT solo formare tumori palpabile 30-40 giorni dopo il trapianto. Analisi degli endpoint a 60 giorni indicano che la co-trapianto con fibroblasti favorisce la crescita del tumore mammario rispetto alle cellule trapiantate PyVmT solo. Mentre le cellule e la matrice di topi C57BL/6J sono stati utilizzati in questi studi, l'isolamento delle cellule e la matrice e l'approccio trapianto può essere applicato nei confronti topi provenienti da diversi background genetico dimostrando versatilità. In sintesi, questo sistema può essere utilizzato per studiare le interazioni molecolari tra cellule stromali e le cellule epiteliali, e supera i limiti critici in modelli di topi immunocompromessi.
Protocol
Discussion
Il contributo funzionale dei fibroblasti nella progressione tumorale è stata dimostrata attraverso modelli di trapianto, in cui il carcinoma fibroblasti associati co-trapiantati con mammarie benigne risultati cellule epiteliali in una maggiore crescita del tumore e l'invasività 5. Approcci di trapianto convenzionale hanno comportato l'utilizzo di topi SCID o nudi di co-trapianto di cellule stromali ed epiteliali provenienti da diversi background genetico del mouse o specie diverse. Topi immunocompro…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo progetto è stato finanziato attraverso dal NIH / NCI codice di autorizzazione R00 CA127357 e l'Università del Kansas Cancer Center Endowment.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
| MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
| Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
| DMEM | VWR | 10000113873 | |
| Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
| amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
| Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
| Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
| Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
| 10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
| Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
| Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
| Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
| Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
| Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
| hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
| DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
| Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
| Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
| Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
| Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
| α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
| CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
| CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
| DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
| Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
| Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
| Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
| Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
| DAPI | Invitrogen | D21490 | |
| Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
| Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
| Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
| Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| # 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
| Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
| Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
| Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
| betadine | fisher | NC9386574 | |
| Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
| Wound staple | Fisher | 12031-07 |
Referências
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