C57BL/6J 마우스의 Stromal 셀 및 암종 세포 이식 내유
Summary
이 보고서에서, 우리는 분리 시스템 및 마우스 유선에서 문화 기증자 세포를 증명하고, orthotopically stromal 분석받는 마우스에서 이러한 세포를 이식 : 내유 종양 개발하는 동안 상피 상호 작용합니다.
Abstract
내유 종양의 진행에 섬유아 세포를 포함한 세포 stromal의 영향은 잘 생쥐의 유선에 stromal 세포와 상피 세포의 이식을 통해 특히, 마우스 모델의 사용을 통해 문서화되었습니다. 현재 이식 모델은 종종 stromal 세포와 상피 세포의 다양한 유전 배경에 의한 immunocompromised 생쥐의 사용을 포함하고 있습니다. 세포외 매트릭스는 종종 일관성있는 세포 세포 상호 작용에 대한 두 가지 세포 유형을 포함하지만, Matrigel 또는 immunogenic 기판 아르 쥐 꼬리 콜라겐의 사용을 포함하는 데 사용됩니다. immunocompromised 생쥐에서 T 세포 기능의 부족 약물 개발 및 효능에 대한 중요한 의미와 함께, 생체내에 내유 종양 진행에 stromal 세포의 정확한 평가를 방지할 수 있습니다. 또한, immunocompromised 마우스는 특별한주의 조건을 번식하고 요구, 비용이 많이 드는 어려운 있습니다. 이러한 장애물을 극복하기 위해, 우리는 orthotopically 일관성 종양 형성을 유도하는 동일한 유전적 배경에서 마우스로 stromal 세포와 상피 세포를 이식하는 방법을 개발했습니다. 이 시스템은 기증자 C57BL/6J 마우스의 정상, 암종 관련 섬유아 세포, PyVmT 내유 암종 세포와 콜라겐을 수확 포함됩니다. 세포가 콜라겐에 포함된 다음과 여성 C57BL/6J 마우스의 사타구니 내유 분비에 이식하고 있습니다. 혼자 PyVmT 세포의 이식은 만져서 알 수있는 종양 30-40일 게시물 이식을 형성합니다. 60일에서 종점 분석은 섬유아 세포와 공동 이식 혼자 이식 PyVmT 세포에 비해 내유 종양의 성장을 향상 나타냅니다. C57BL/6J 마우스의 세포와 매트릭스는 이러한 연구에 사용했지만, 세포 매트릭스 및 이식 방식의 고립은 다용도을 보여주는 서로 다른 유전 배경을 마우스 방향으로 적용될 수 있습니다. 요약이 시스템은 stromal 세포와 상피 세포 사이의 분자 상호 작용을 조사하는 데 사용될 수 있으며, immunocompromised 마우스 모델에서 중요한 한계를 극복.
Protocol
Discussion
종양 진행에 섬유아 세포의 기능적 기여는 암종 관련 섬유아 세포가 증가 종양 성장과 invasiveness 5 양성 상피 세포 내유 결과와 함께 공동으로 이식하는, 이식 모델을 통해 증명되었습니다. 기존의 이식 방법은 다른 유전적 배경 마우스 또는 다른 종 공동 이식 stromal와 상피 세포 SCID이나 누드 마우스의 사용을 참여합니다. Immunocompromised 마우스는 종양 특정 항원과 종양 세포의 타겟팅 이후,…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 프로젝트는 NIH / NCI 부여 번호 R00 CA127357와 캔자스 암 센터 엔다우먼트 대학으로 통해 후원했다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
| MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
| Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
| DMEM | VWR | 10000113873 | |
| Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
| amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
| Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
| Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
| Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
| 10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
| Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
| Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
| Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
| Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
| Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
| hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
| DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
| Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
| Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
| Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
| Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
| α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
| CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
| CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
| DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
| Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
| Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
| Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
| Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
| DAPI | Invitrogen | D21490 | |
| Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
| Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
| Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
| Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| # 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
| Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
| Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
| Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
| betadine | fisher | NC9386574 | |
| Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
| Wound staple | Fisher | 12031-07 |
Referências
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