黄熱病の蚊から血球を収集し、染色のためのプロトコルネッタイシマカ</em
Summary
記述されている蚊の血球細胞を収集して染色する、まだ正確な方法を簡素化。私たちの方法は、ヒトスジシマカ蚊の血球のクリーンな準備を分離するために、高いインジェクション技術の精度で灌流のシンプルさを兼ね備えています。このメソッドは、血球とその豊かさの種類の知識を必要とする研究を促進する。
Abstract
蚊は、黄熱病ウイルス、マラリア原虫やフィラリアワームなどの病気を引き起こす病原体の数のベクトルです。研究所は、そのような病原体1,2に抵抗性遺伝子組換え蚊を発生させることを望んで病気のベクトルの種の自然免疫系の抗病原体成分を調査している。蚊の自然免疫系は防御3の複数の行で構成されています。上皮で裏打ちされた蚊中腸4で課された障壁を逃れるために管理する病原体は血リンパを入力し、循環血球、カプセル化する重要な細胞成分と巻き込むの病原体5,6が発生する 。研究者は、蚊に造血組織のための証拠を発見していないと、現在の証拠は、血球の数が羽化に固定され、数字が実際に蚊の7歳と低下する場合があることを示唆している。適切に収集し、医学的に重要な昆虫から血球を識別する能力は、細胞性免疫の研究に不可欠なステップです。しかし、蚊と血リンパの限られた容積の小さいサイズは、免疫細胞を収集するために挑戦をもたらす。
蚊血球を収集するための2つの確立された方法は、頭部と胸部の間に膜necklike領域（すなわち、子宮頸部）に注入され、灌流血リンパが収集される生理食塩水でカット口先8、およびボリュームの変位（灌流）、からの血リンパの除名を含む腹部9、10の遠位領域内の引き裂かれた開口部から。これらの技術は、しかし、それぞれ11、血球の低い回収と脂肪体細胞による汚染の可能性によって制限されている。スケールと内部の組織11を汚染のレベルを低減しつつ、より多くの最近の方法は、抗凝固剤のバッファを使用することによって免疫細胞の高い注入/回収の改善回復と呼びます。その方式で初代培養のための血球を収集し、維持する改良法を可能にする一方で、それは注射の数を伴いますし、下流の目標は、収集、修正および診断のための血球を染色する場合に必要ではないステップを収集。ここでは、 ネッタイシマカ蚊の血球のクリーンな準備を分離するために、高いインジェクション技術の精度で、生理食塩水の代わりに抗凝固剤のバッファを使用して、血流のシンプルさを組み合わせた蚊の血リンパの収集の私達の方法を示しています。
Protocol
Discussion
血球収集方法は、以前に発行されたメソッドから変更と1つのより少ない手順でヒトスジシマカ蚊から血球のクリーンな準備を分離することができますされ、ここで説明。私たちの特定の関心は、 ヒトスジシマカ蚊の血球集団を特徴付けるにある一方で、我々は最初の試験が適切な注入量を決定するために実施された後、この手法は他の蚊のグループに適用できると考えていま?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、蚊飼育用ジョンフレイとベンピーターソンに感謝します。我々はまた、血球の顕微鏡写真のヘルプはクリスティンデイビスとゲイリーRadiceに感謝。この研究は、A.テーラングにAA Qayumと教員の助成金にリッチモンドアーツ＆サイエンスサマーフェローシップ大学によって資金を供給された。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Schneider’s Medium | Sigma-Aldrich | S0146 | |
| Fetal bovine serum | Sigma-Aldrich | F0643 | |
| Hema3 stain kit | Fisher | 123-869 | |
| Glass needles (borosilicate with filament) |
Sutter Instrument | BF100-78-10 | 1.0mm O.D. and 0.78mm I.D. |
| Needle puller | Sutter Instruments | Model P-87 | |
| MicroInjector | Tritech Research | MINJ-PD | |
| Needle holder | Tritech Research | MINJ-4 |
Referências
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