Méthode d'agglutination de particules pour l'identification des poliovirus
Summary
Une particule récemment développé une agglutination roman (PA) de dosage utilisant molécule réceptrice du virus a permis une identification rapide et facile de poliovirus (PV). Dans cet article, nous allons montrer la procédure pour le dosage de PA pour l'identification PV.
Abstract
Dans le Global Polio Eradication Initiative, le diagnostic de laboratoire joue un rôle crucial en isolant et en identifiant PV à partir des échantillons de selles de paralysie flasque aiguë (PFA). À l'Organisation mondiale de la Santé (OMS) Global Polio Laboratory Network PV isolement et l'identification sont actuellement effectuées en utilisant le système de culture cellulaire et en temps réel de RT-PCR, respectivement. Dans l'ère post-éradication de la PV, les procédures d'identification simple et rapide serait utile pour la confirmation rapide des cas de polio dans les laboratoires nationaux. Dans la présente étude, nous allons montrer la procédure du roman de PA test développé pour l'identification PV. Ce test utilise PA interaction du PV du récepteur numérique (PVR) et la molécule de virion qui est une affinité spécifique et uniforme pour tous les sérotypes de PV. La procédure est simple (une procédure étape en plaques de réaction) et rapide (les résultats peuvent être obtenus dans les 2 h de réaction), et le résultat est visuellement observé (observation de l'agglutination des particules de gélatine).
Protocol
Discussion
L'unique point de ce test PA est l'utilisation de la molécule au lieu PVR de l'anti-PV anticorps pour la détection de PV 2. Ceci permet une interaction spécifique des particules de gélatine sensibilisées avec PV avec une affinité uniforme à tous les trois sérotypes du PV 3-6. Nous avons utilisé une forme immunoadhésine de PVR (PVR-IgG2a) pour la sensibilisation des particules de gélatine, car les formes monomères de PVR ont seulement des affinités modérées au site de liaison unique …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous sommes reconnaissants à Junko Wada pour son excellente assistance technique. Nous sommes reconnaissants au Prof Akio Nomoto d'avoir bien voulu fournir un vecteur d'expression baculovirus pour le PVR-IgG2a. Cette étude a été financée en partie par des subventions en aide à la promotion de l'éradication de la poliomyélite et de la recherche sur les maladies émergentes et ré-émergentes Maladies infectieuses du ministère de la Santé, du Travail et des Affaires sociales.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sensitized-gelatin particles | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Reconstitution buffer | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Microtitration plate | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Anti-PV antibody | RIVM |
Referências
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