Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo
Summary
La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. In questo articolo mostriamo un metodo di preparazione uovo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza.
Abstract
Lo studio di sviluppo è stato molto semplificato dall'uso del embrione di pollo come modello sperimentale. La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. Inoltre, consente di perturbazioni molecolare di diversi tipi, tra cui il posizionamento di proteine rivestite perle e l'introduzione di DNA plasmidico mediante elettroporazione in ovo. Questi esperimenti hanno fornito dati importanti per lo sviluppo del sistema nervoso centrale e periferico. Per molti di questi studi, è necessario aprire il guscio d'uovo e richiudere senza perturbare la crescita dell'embrione. L'embrione può essere esaminata a successivi stadi di sviluppo con la riapertura del guscio d'uovo. Mentre ci sono diversi metodi eccellente per l'apertura di uova di gallina, in questo articolo si dimostra un metodo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza. In questo metodo, l'uovo si basa su un lato e una piccola finestra è tagliata nella shell. Dopo la procedura sperimentale, la shell viene utilizzato per coprire l'uovo per la durata del suo sviluppo. Nastro in plastica trasparente sovrastante il guscio protegge l'embrione e aiuta a mantenere l'idratazione durante il resto del periodo di incubazione. Questo metodo è stato utilizzato a partire due giorni di incubazione e ha permesso la sopravvivenza attraverso matura età embrionale.
Protocol
Discussion
Questo metodo permette di lunghi tempi di sopravvivenza dopo manipolazioni sperimentali. Per esempio, dye-etichettatura studi hanno permesso la sopravvivenza di E10 o poi in uno studio di rilevamento destino (1). Inoltre, è stato utilizzato per gli studi in elettroporazione ovo che forniscono l'alterazione dei livelli di espressione genica e sviluppo necessari per procedere alle fasi successive di sviluppo (2-6). Questa tecnica finestre può essere utilizzato in combinazione con qualsiasi procedura che richiede la sopravvivenza dopo le…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotating incubator | Profi | Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60% | ||
| 70 % EtOH | ||||
| gauze | ||||
| 3M plastic tape | ||||
| 10cc syringe | 1/egg | |||
| 18G needles | 1½ inch needle, 1/syringe | |||
| Dissection scissors | 4″ sharp straight blades | |||
| Fertilized Eggs |
Referências
- Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
- Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
- Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. . Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
- Huffman, K. J., Cramer, K. S. . Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
- Krull, C. E. . Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
- Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. . Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
