Gelişim Araştırmaları Pencereleme Tavuk Yumurta
Summary
Civciv bıldırcın kuruntulardan ve odak boya etiketleme dahil olmak üzere çeşitli yaklaşımlar kullanarak hücre kaderi harita deneyler için embriyo erişilebilirlik kolaylığı sağladı. Bu yazıda, uzun sağkalım süreleri için optimize edilmiş bir yumurta hazırlama yöntemi göstermektedir.
Abstract
Gelişme çalışma büyük ölçüde deneysel bir model olarak civciv embriyo kullanımı yardımıyla olmuştur. Civciv bıldırcın kuruntulardan ve odak boya etiketleme dahil olmak üzere çeşitli yaklaşımlar kullanarak hücre kaderi harita deneyler için embriyo erişilebilirlik kolaylığı sağladı. Buna ek olarak, ovo elektroporasyon kullanarak plazmid DNA, protein kaplı boncuklar ve giriş yerleştirilmesi de dahil olmak üzere çeşitli moleküler tedirginlikler sağlar. Bu deneyler, merkezi ve periferik sinir sistemi gelişimi hakkında önemli veriler vermiştir. Bu çalışmaların çoğu için, kabuğu açık ve embriyonun büyüme rahatsızlık vermesini olmadan Sık kalkış için gereklidir. Embriyo, yumurta kabuğu yeniden açarak izleyen gelişim evreleri incelenebilir. Bu makalede, tavuk yumurtası açmak için birkaç mükemmel bir yöntem olmakla birlikte uzun sağkalım süreleri için optimize edilmiş bir yöntem göstermektedir. Bu yöntemde, yumurta yan dayanmaktadır ve küçük bir pencere kabuk kesilir. Deneysel işlemin ardından, kabuk, yumurta gelişimi süresince kapsayacak şekilde kullanılır. Kabuğu örten şeffaf plastik bant embriyo korur ve kuluçka dönemi kalan sırasında hidrasyon korumak yardımcı olur. Bu yöntem, iki gün inkübasyon başında kullanılır olmuştur ve olgun embriyonik çağlar boyunca hayatta kalma izin verdi.
Protocol
Discussion
Bu yöntem deneysel manipülasyonlar uzun sağkalım süreleri sağlar. Örneğin, boya-etiketleme çalışmaları, E10 ya da daha sonra bir kader haritalama çalışması (1) hayatta kalma izin verdi. Buna ek olarak, gen ekspresyon seviyelerinin değiştirilmesi ve daha sonra gelişimsel aşamaları (2-6) devam etmek için gerekli geliştirme ovo elektroporasyon çalışmalarda kullanılmaktadır. Bu pencere tekniği embriyo manipülasyonları sonra hayatta kalma gerektiren herhangi bir işlem ile birlikte kullanılabilir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotating incubator | Profi | Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60% | ||
| 70 % EtOH | ||||
| gauze | ||||
| 3M plastic tape | ||||
| 10cc syringe | 1/egg | |||
| 18G needles | 1½ inch needle, 1/syringe | |||
| Dissection scissors | 4″ sharp straight blades | |||
| Fertilized Eggs |
Referências
- Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
- Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
- Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. . Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
- Huffman, K. J., Cramer, K. S. . Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
- Krull, C. E. . Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
- Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. . Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
