Constrição crônica do nervo ciático e Teste de Hipersensibilidade dor em ratos

Summary

Devido à simplicidade da cirurgia e os resultados robusto comportamental, constrição crónica do nervo ciático é um dos modelos pré-eminentes animais de dor neuropática. Dentro de 24 horas após a cirurgia, hipersensibilidade à dor é estabelecido e pode ser medida quantitativamente utilizando um von Frey aesthesiometer (teste mecânico) e medidor de analgesia plantar (teste térmico).

Abstract

Dor neuropática crônica, resultante de danos ao sistema nervoso central ou periférico, é uma condição prevalente e incapacitante, afetando 7-18% da população ^1,2. Os sintomas incluem dor (queimação, formigamento, choque elétrico como) espontânea, disestesia, parestesia, alodinia (dor resultante de normalmente não dolorosos estímulos) e hiperalgesia (um aumento de resposta a estímulos dolorosos). Os sintomas sensoriais são co-mórbidas com deficiências comportamentais, tais como insônia e depressão. Para estudar a dor neuropática crónica vários modelos animais que imitam a lesão do nervo periférico têm sido desenvolvidos, um dos mais amplamente utilizado é Bennett e (1988) unilateral de Xie lesão do nervo ciático constrição crónica (ICC) ³ (Figura 1). Aqui apresentamos um método para executar ICC e teste de hipersensibilidade a dor.

ICC é realizada sob anestesia, com o nervo ciático de um lado exposto fazendo comoincisão parentes, e cortando o tecido conjuntivo entre as superficial glúteos e bíceps femoral. Quatro ligaduras intestino crômico são amarrados frouxamente ao redor do nervo ciático em intervalos de 1 mm, apenas para ocluir, mas não deter o fluxo de sangue epineural. A ferida é fechada com suturas no músculo e grampos na pele. O animal é então permitido recuperar da cirurgia durante 24 horas antes do teste de hipersensibilidade dor começa.

Para os testes comportamentais, os ratos são colocados no dispositivo de ensaio e são permitidos para habituar o procedimento de teste. A área de teste é a superfície mid-plantar da pata posterior (Figura 2), que cai dentro da distribuição do nervo ciático. Limiar de retirada mecânica é avaliado por ambas as patas traseiras mecanicamente estimulando lesadas e usando um eletrônico dinâmico plantar von Frey aesthesiometer ou manual von Frey cabelos ^4. O limiar de retirada mecânica é a pressão máxima exercida(Em gramas) que desencadeia retirada da pata. Para a medição da latência de retirada térmica, primeiro descrito por Hargreaves et ai (1988), a pata posterior é exposta a um feixe de calor radiante através de uma superfície de vidro transparente com um medidor de analgesia plantar ^5,6. A latência de retirada ao estímulo de calor é registrado como o tempo para retirada da pata nas duas patas traseiras lesadas e não lesadas. ICC sequência, limiar de retirada mecânica, bem como a latência de retirada térmica na pata lesada são ambos significativamente reduzido, em comparação com as medições de linha de base e da pata não lesionado (Figura 3). O modelo ICC de lesão do nervo periférico combinados com testes de hipersensibilidade à dor fornece um sistema modelo para investigar a eficácia de agentes terapêuticos potenciais para modificar a dor neuropática crônica. No nosso laboratório, nós utilizamos ICC ao lado de sensibilidade térmica e mecânica das patas traseiras para investigar o papel das interacções neuro-imunes na patogénesee tratamento da dor neuropática.

Protocol

1. Constrição do nervo ciático crônica Técnicas assépticas deve ser utilizado para o procedimento cirúrgico. Desinfectar a superfície de trabalho cirúrgico com etanol a 70% e em preparar Advance Instruments estéril (por exemplo, tesouras finas, fórceps e afastador), gazes, grampos e esfregaços por autoclavagem. Para cirurgias múltiplas, limpar e instrumentos reesterilizar com etanol a 70% ou um esterilizador seco grânulo entre ratos. Uma máscara cirúrgica, gorro cabelo e luvas …

Discussion

CCI é amplamente utilizado modelo de lesão de nervo periférico da dor neuropática crônica. É relativamente simples de executar, e produz hipersensibilidade dor robusta e estável durante pelo menos um mês após a lesão. Após CCI, os ratos apresentam postura anormal da pata ferida (dedos unidos e plantar-flexionados e pata evertido), bem como repetidos tremores, guarda e lambendo da pata ferida sugerindo a presença de dor espontânea ^9. Além disso a disfunção sensorial, vários investigadores demo…

Materials

Name of the reagent/equipment	Company	Catalogue number	Comments
Chromic gut	Ethicon	G-211	4-0 thickness
Isoflurane	Delvet Pty. Ltd., Seven Hills, NSW	n/a
Mersilk	Ethicon	W-580	5-0 thickness
Autoclip	Becton Dickinson	427631	9 mm stainless steel
Riodine	Orion	R1000802F	1% w/v iodine
Thermal plantar analgesia instrument	Ugo Basile	37370
Dynamic plantar aesthesiometer	Ugo Basile	37400