Een vereenvoudigde methode voor<em> In situ</em> Excisie van het hoornvlies en het verwijderen van de ingewanden van retinaal weefsel van Human Ocular Globe

Summary

De paper beschrijft een vereenvoudigde techniek om accijnzen hoornvlies en het netvlies weefsels uithalen van de oculaire bol van de menselijke postmortale donoren. De techniek die hier beschreven zal helpen om accijnzen goede kwaliteit weefsels worden gebruikt voor transplantatie, chirurgisch of wetenschappelijke doeleinden zonder deze te beschadigen andere weefsels van het oculair wereld.

Abstract

Enucleatie is het proces van het ophalen van de oculaire hele wereld van een overleden donor en de rest van de wereld ongestoord. Excisie verwijst naar het ophalen van oculaire weefsels, in het bijzonder hoornvlies, door een vermindering van het los van het oculair wereld. Ingewanden is het verwijderen van de ingewanden hier aangeduid als retina. De oculaire wereld bestaat uit het hoornvlies, de sclera, het glasachtig lichaam, de lens, de iris, het netvlies, het vaatvlies, spieren enz. (Suppl. figuur 1). Wanneer een patiënt lijdt aan beschadiging van het hoornvlies, de cornea verwijderd moet worden en een gezonde men moet worden getransplanteerd door keratoplastische operaties. Genetische aandoeningen of gebreken in functie van de retina in gevaar kunnen brengen visie. Menselijke oculaire bollen kan worden gebruikt voor verschillende chirurgische procedures, zoals de ogen bankieren, transplantatie van menselijke cornea of ​​sclera en onderzoek op het oculaire weefsels. Er is echter weinig informatie beschikbaar over het menselijk hoornvlies en het netvlies excisie, waarschijnlijk te wijten aan de limited toegankelijkheid van menselijke weefsels. De meeste studies beschrijven van soortgelijke procedures worden uitgevoerd op diermodellen. Onderzoek wetenschappers rekenen op de beschikbaarheid van goed ontleed en goed geconserveerde oculaire weefsels in om de kennis uit te breiden op de menselijke ogen ontwikkeling, homeostase en functie. Zoals we ontvangen hoog bedrag van oculaire bollen, waarvan ongeveer 40% (tabel 1) van hen worden gebruikt voor onderzoeksdoeleinden zijn wij in staat om grote hoeveelheid experimenten uit te voeren op deze weefsels, het definiëren van technieken om de accijnzen en regelmatig te bewaren hen.

Het hoornvlies is een avasculaire weefsel dat de transmissie van licht in staat stelt op het netvlies en voor dit doel moet altijd handhaven van een goede mate van transparantie. Binnen het hoornvlies, de limbus regio, die is een reservoir van de stamcellen, helpt de reconstructie van epitheliale cellen en beperkt de begroeiing van het bindvlies behoud van het hoornvlies transparantie en duidelijkheid. De grootte en e ickness van het hoornvlies zijn van cruciaal belang voor de duidelijke visie, zoals veranderingen in een van beide zou kunnen leiden tot afgeleid, onduidelijke visie. Het hoornvlies bestaat uit 5 lagen; a) epitheel, b) Bowman's laag, c) stroma, d), Descemet membraan en e), endotheel. Alle lagen moeten goed functioneren om te zorgen voor duidelijke visie ^4,5,6. Het vaatvlies is de intermediair tuniek tussen de sclera en de retina, begrensd aan de binnenkant van de membraan van Bruch en is verantwoordelijk voor de bloedstroom in het oog. De choroid helpt om de temperatuur en levert voeding regelen op de buitenste lagen van het netvlies ^5,6. Het netvlies is een laag van zenuwweefsel dat de achterkant van het oculair wereld (Suppl. figuur 1) omvat en bestaat uit twee delen: een photoreceptive deel en een niet-ontvankelijke deel. Het netvlies zorgt voor het ontvangen van het licht van het hoornvlies en de lens en zet het om in de chemische energie uiteindelijk doorgegeven aan de hersenen met behulp van de optische zenuw ^5,6.

ove_content "> Het doel van dit artikel is om een ​​protocol voor het ontleden van het hoornvlies en het netvlies weefsels van menselijke oculaire bollen. Het vermijden van kruisbesmetting met aangrenzende weefsels en het behoud van RNA integriteit is van fundamenteel belang als dergelijke weefsels onmisbaar zijn voor gericht onderzoeksdoeleinden op (i) het karakteriseren van het transcriptoom van de oculaire weefsels, (ii) het isoleren van stamcellen voor regeneratieve geneeskunde projecten, en (iii) de evaluatie van histologische verschillen tussen de weefsels van de normale / getroffen personen. In dit artikel beschrijven we de techniek die we nu gebruiken voor het verwijderen het hoornvlies, het vaatvlies en het netvlies weefsels van een oculaire hele wereld. Hier bieden wij u een gedetailleerd protocol voor de ontleding van het menselijk oculaire hele wereld en de excisie van het hoornvlies en het netvlies weefsels. De bijbehorende video zal onderzoekers helpen om een ​​geschikte techniek voor het ophalen te leren kostbare weefsels die moeilijk regelmatig vinden.

Protocol

1. In situ Excisie van het hoornvlies van Ocular Globes Schakel de laminaire flow-kast 15 minuten vóór gebruik. Maak de laminaire stroming kap met behulp van 70% isopropylalcohol. Zet op persoonlijke beschermende kleding, zoals chirurgische pet en masker. Scrub handen en onderarmen en afdrogen met een steriele doek. Draag steriele handschoenen en een schort of bussen met een aseptische techniek. Stel de steriele veld door het plaatsen van een steriel instrument lade aseptisch. Controleer …

Discussion

Zowel de juiste excisie en een goede bewaring van het hoornvlies en het netvlies weefsels zijn van cruciaal belang als kleine gebreken, zoals endotheliale schade of hoog aantal van Descemet plooien kan leiden tot transplantaatfalen van het hoornvlies terwijl de temperatuur wijzigingen of verkeerd gebruik kan de integriteit van het netvlies weefsels in gevaar brengen. Het doel van dit artikel is te laten zien hoe het hoornvlies en het netvlies weefsels optimaal worden geïsoleerd, zonder het induceren van schade of wijzi…

Materials

Materials for excision of cornea and retina.

Product description	Dimensions	Company / Institute
Guarded disposable scalpel	Blade size 15	Swann-Morton
Sterile bandages	5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs	Artsana
Sterile disposable medical towel	35 X 50 cm	U.Jet
Sterile scissors	Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt	e.janach
Sterile forceps	Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth	e.janach
Corneal claw – Disposable medical device		NIIOS (Hippocratech)
	Preparations
PBS	100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water)	Sigma-Aldrich
Na-thiosulphate	1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x]	Sigma-Aldrich
I-PVP	5 gm I-PVP in 1 litre d/w	Sigma-Aldrich

Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.

Materials for storage medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1900 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml/l)	20 ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10ml/l)	20 ml
Antibiotic/antimycotic	Sigma-aldrich	A5955-20ML	10ml/l	20 ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml

Table 3. Materials for storage medium.

Preparation of storage medium

Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.

Materials for transport medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1800 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml/l)	20ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10 ml/l)	20ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml
Dextran t500	Pharmacosmos	551005004007	6% (60 gm/litre)	120 g/l

Table 4. Material for transport medium.

Preparation of transport medium

Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.