Het overwinnen van reageert niet in experimentele autoimmune encefalomyelitis (EAE) Resistant muizenstammen door adoptieve overdracht en Antigene Challenge
Summary
Sommige muizenstammen in staat zijn om de inductie van experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) te weerstaan met myeline basisch eiwit. Hier beschreven is een eenvoudige immunisatieprotocol dat het niet-reageren omkeert en induceert verlammende ziekte in een aantal typische EAE resistent muis vlekken.
Abstract
Experimentele auto-immune encephalomyelitis (EAE) is een ontstekingsziekte van het centrale zenuwstelsel (CZS) en is gebruikt als diermodel voor studie van de menselijke demyeliniserende aandoening, multiple sclerose (MS). EAE wordt gekenmerkt door pathologische infiltratie van mononucleaire cellen in het centraal zenuwstelsel en klinische manifestatie van paralytic ziekte. Net als bij MS, EAE is ook onder genetische controle in dat sommige muizenstammen zijn vatbaar voor de ziekte van inductie, terwijl anderen zijn tegen. Gewoonlijk C57BL / 6 (H-2b) muizen geïmmuniseerd met myeline basisch eiwit (MBP) niet geraakte tekenen ontwikkelen. Dit is zeker niet ongevoeligheid te wijten zijn aan antigeen of antigeen verwerking presentatie van MBP, als een experimentele protocol beschreven werd gebruikt om ernstige EAE induceren C57BL / 6 muizen en andere bekende resistente muizenstammen. Bovendien was encefalitogene T celklonen uit C57BL / 6 en Balb / c muizen reactief MBP is succesvolledig geïsoleerd en gepropageerd.
De experimentele protocol gaat met behulp van een mobiele adoptieve overdracht systeem waarin MBP-primer (200 ug / muis) C57BL / 6 donor lymfeklier cellen worden geïsoleerd en gekweekt gedurende vijf dagen met het antigeen aan het zwembad van MBP-specifieke T-cellen uit te breiden. Aan het einde van de kweekperiode worden 50000000 levensvatbare cellen overgebracht naar naïeve syngene afnemers de staartader. Ontvanger muizen dus normaal gesproken behandeld ontwikkelen geen EAE, dus opnieuw hun resistente status, en zij kunnen voor onbepaalde tijd normaal. Tien dagen na de cell transfer, zijn ontvangende muizen uitgedaagd met volledig Freund's adjuvans (CFA)-geëmulgeerde MBP in vier plaatsen in de flanken. Ernstige EAE begint in deze muizen de ontwikkeling van tien tot veertien dagen na challenge. De resultaten toonden aan dat de inductie van de ziekte was antigene specifiek uitdaging met irrelevante antigenen veroorzaakte geen klinische symptomen van de ziekte. Opmerkelijk is dat een titratie van het antigeen dosis gebruikt om detegen de ontvanger muizen toonde aan dat het kan vanaf 5 ^ g / muis. Bovendien is een kinetische studie van het tijdstip van een antigeen is gebleken dat uitdaging ziekte induceren effectief was al 5 dagen na een antigeen en zolang dan 445 dagen na antigeen. Deze gegevens sterk punt in de richting van de betrokkenheid van een "lange duur" T-cel populatie in het handhaven van niet-reageren. De betrokkenheid van regulatoire T-cellen (Tregs) in dit systeem is niet gedefinieerd.
Protocol
Discussion
Studies van EAE in muizen vaak gebruik maken van de neuroantigens, myeline basis eiwit (MBP), proteolipid proteïne (PLP) of myeline oligodendrocyt eiwit (MOG). Eerdere studies meestal gebruikt MBP. PLP stimuleert sterke en consistente reacties van SJL muizen. Meer recent, MOG is de gebruikte gemeenschappelijke neuroantigen omdat B6 muizen zijn gevoelig voor de ziekte van inductie met dit antigeen. Veel van het gen gerichte muizenstammen op de B6 genetische achtergrond. Interessant, B6 muizen zijn gevoelig voor inductie…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Mede ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health (R01 NS37253 en N01 NS055167) en de National Multiple Sclerosis Society (RG 3288-A6).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Guinea pig spinal cords | Rockland Immuno-chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI |
231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | B-D www.bd.com/us |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech Inc. Manassas, VA www.cellgro.com |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine |
B6 mice: 0000664 |
Referências
- Swanborg, R. H., Sabato, G. D. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage. J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).
- McCarron, R., McFarlin, D. E. Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein. J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains. J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).
- Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis. Nat. Med. 15, 626-632 (2009).
- Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice. J. Immunol. 173, 828-834 (2004).
- Anderton, S. M. Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed. Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).
- Arnon, R. Experimental allergic encephalomyelitis – susceptibility and suppression. Immunol. Rev. 55, 5 (1981).
- Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g. J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).
- Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II. J. Immunol. 154, 388-398 (1995).
- Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).
- Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation. Nature Med. 13, 423-431 (2007).
- Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).
