Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge
Summary
Bestimmte Maus-Stämme sind in der Lage, die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) mit Myelin basisches Protein zu widerstehen. Hier beschriebene ist ein einfaches Protokoll, das die Immunisierung Teilnahmslosigkeit umkehrt und induziert paralytischen Erkrankung in mehreren typischen EAE resistent Maus Flecken.
Abstract
Experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis (EAE) ist eine entzündliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (CNS) und hat als Tiermodell für die Untersuchung des menschlichen demyelinisierende Krankheit, Multiple Sklerose (MS) verwendet. EAE wird durch pathologische Infiltration von mononukleären Zellen in das ZNS und durch klinische Manifestation der paralytischen Erkrankung gekennzeichnet. Ähnlich wie bei MS, ist EAE auch unter genetischer Kontrolle, dass bestimmte Mausstämme sind anfällig für Krankheiten Induktion während andere resistenter sind. Typischerweise C57BL / 6 (H-2 b) Mäusen, die mit Myelin basisches Protein immunisiert (MBP) scheitern zu Lähmungserscheinungen entwickeln. Diese Teilnahmslosigkeit ist sicherlich nicht aufgrund von Mängeln an der Antigen-Verarbeitung oder die Antigen-Präsentation von MBP, als eine experimentelle hier beschriebene Protokoll verwendet worden war, um schwere EAE in C57BL / 6 Mäusen sowie anderen renommierten beständig Mausstämmen zu induzieren. Darüber hinaus hatte enzephalitogener T-Zell-Klone aus C57BL / 6 und Balb / c-Mäusen reaktiv MBP Erfolgvoll isoliert und vermehrt.
Das experimentelle Protokoll beinhaltet die Verwendung eines zellulären adoptiven Transfer, bei dem MBP-geprimten (200 ug / Maus) C57BL / 6 Donor Lymphknotenzellen isoliert und kultiviert für fünf Tage mit dem Antigen, um den Pool von MBP-spezifischen T-Zellen zeigen. Am Ende der Kulturzeit, werden 50 Millionen lebensfähige Zellen in naive syngene-empfänger über die Schwanzvene übertragen. Empfängermäuse so behandelt in der Regel nicht entwickeln EAE, so Bekräftigung ihrer Resistenz, und sie können normal bleiben auf unbestimmte Zeit. Zehn Tage nach der Zellübertragung werden Empfängermäuse mit komplettem Freund-Adjuvans (CFA) emulgiert-MBP in vier Stellen in den Flanken in Frage gestellt. Schwere EAE beginnt, sich in diesen Mäusen zehn bis vierzehn Tage nach der Herausforderung zu entwickeln. Die Ergebnisse zeigten, dass die Induktion von antigen spezifische Krankheit war, als Herausforderung, nicht mit irrelevanten Antigenen induzieren habe klinischen Anzeichen einer Krankheit. Bezeichnenderweise eine Titration des Antigen-Dosis verwendetfordern die Empfänger Mäusen zeigten, dass es sein könnte so niedrig wie 5 pg / Maus. Darüber hinaus zeigte die Untersuchung der Kinetik der Zeitpunkt der Antigen-Challenge, dass Herausforderung Krankheit zu induzieren wirksam war bereits nach 5 Tagen nach der Antigen-Challenge und solange über 445 Tage nach der Antigen-Challenge. Diese Daten weisen auf stark die Beteiligung eines "langlebigen" T-Zell-Population bei der Aufrechterhaltung Teilnahmslosigkeit. Die Beteiligung von regulatorischen T-Zellen (Tregs) in diesem System ist nicht definiert.
Protocol
Discussion
Studien von EAE in Mäusen verwenden oft die neuroantigens, Myelin-basisches Protein (MBP), Proteolipidprotein (PLP) oder von Myelin Oligodendrozyten Protein (MOG). Frühere Studien meist MBP verwendet. PLP stimuliert die starke und konsistente Antworten von SJL-Mäusen. In jüngerer Zeit ist der gemeinsame MOG Neuroantigen verwendet, weil B6-Mäuse anfälliger für Krankheiten Induktion mit diesem Antigen sind. Viele der gezielten Gen-Maus-Stämme sind auf der B6 genetischen Hintergrund. Interessanterweise sind B6-Mäu…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
In Teilen unterstützt durch Zuschüsse der National Institutes of Health (R01 NS37253 und N01 NS055167) und der National Multiple Sclerosis Society (RG 3288-A6).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Guinea pig spinal cords | Rockland Immuno-chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI |
231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | B-D www.bd.com/us |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech Inc. Manassas, VA www.cellgro.com |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine |
B6 mice: 0000664 |
Referências
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