ASC farklılaşma kontrol için bir iki tabakalı Hidrojel mühendislik
Summary
Bu protokol çevreleyen hücre dışı matriks gelen ipucu almak ve birden fenotipleri farklılaşması için indüklenebilir kök hücrelerin doğal yeteneği kullanılmasına odaklanmıştır. Bu yöntemler yazının aynı anda yağ kaynaklı kök hücreleri birlikte ayırt etmek için, PEG-fibrin ve kollajen oluşan iki katmanlı hidrojel kullanan bir model, bizim ve nitelendirilmesi uzanır<sup> 1</sup>.
Abstract
Yılda Doğal polimerler nedeniyle ana biyouyumluluk ve in vitro ve in vivo olarak hücreleri ile etkileşim yeteneği daha fazla önem kazanmıştır. Rejeneratif tıpta umut vaat araştırma bir alan roman biyomalzemeler ve kök hücre kombinatoryal kullanılmasıdır. Doku mühendisliği alanında temel bir strateji hücre fonksiyonu yönlendirilmesi için üç boyutlu İskele (örneğin, hücre dışı matriks, hidrojeller, mikro / nano parçacıklar decellularized) kullanılmasıdır. Bu teknoloji, hücrelerin, onlar yapışabilir bunun üzerine bir substrata ihtiyaç çoğalırlar ve onların farklılaşmış hücre fenotipi ve fonksiyonu 2-3 olduğunu ifade keşif dönüşmüştür. Daha yakın zamanlarda, aynı zamanda hücre yapışması için, bu yüzeyler kullanımı, aynı zamanda etkileşime girer ve matris substrat (örn., hücre dışı matris, ECM) 4 kuyruklar alır sadece olduğu tespit edilmiştir. Bu nedenle, hücre ve iskelesi bir karşılıklı bağlantısı vardırdoku gelişimi, organizasyon ve nihai fonksiyonunu kontrol etmek için hizmet vermektedir. Yağ kökenli kök hücreleri (TSK) mezenkimal olan, non-hematopoetik kök hücreler çok soy diferansiyasyon sergileyen ve hücrelerin hazır kaynağıdır (yani pre-vasküler endotelin ve perisitler) olarak hizmet verebilir adipoz dokuda sunuyoruz. Bizim hipotezi yağ kaynaklı kök hücreleri iki katmanlı matrisler 1 tek ortak kültür onlar tarafından eş zamanlı olarak farklı fenotipleri doğru yönlendirilecek olmasıdır. Laboratuvarımız dermal yara iyileşmesi üzerine odaklanmıştır. Bu amaçla, bir dermal özgü yara iyileşmesi ECM çevrenin özelliklerini ve işlevlerini taklit tek bir kompozit doğal biyomalzemeler gelen matrisi, fibrin, kollajen ve kitosan yarattı.
Protocol
Discussion
TSK ve izolasyon ve çeşitli hücre tipleri doğru ayırt etmek için yeteneği edilmeleri kolay olduğundan iyi bilinmektedir. Bu yazıda anlatılan teknikleri ile, aynı anda birden fazla biomatrices bu hücrelerin teşhir ederek TSK plastisite yararlanmak için edebiliyoruz. Hücreler CSM tabanı uzağa göç ve onların çevresindeki ekstrasellüler çevre girerken, hücrelerin iskele gelen ipucu almak ve ya "stemness" (kollajen) koruyabilir veya damar-damar-destekleyici hücre tipleri (fibrin) doğru ay?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SN Pittsburgh Doku Mühendisliği Girişimi bir Doktora Sonrası Araştırma Bursu Grant tarafından desteklenmiştir. DOZ Cenevre Vakfı tarafından verilen bir hibe ile desteklenmektedir.
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) | Gibco | 14175 | Consumable |
| Fetal Bovine Serum | Hyclone | SH30071.03 | Consumable |
| Collagenase Type II | Sigma-Aldrich | C6685 | Consumable |
| 70-μm Nylon Mesh Filter | BD Biosciences | 352350 | Consumable |
| 100-μm Nylon Mesh Filter | BD Biosciences | 352360 | Consumable |
| MesenPRO Growth Medium System | Invitrogen | 12746-012 | Consumable |
| L-Glutamine | Gibco | 25030 | Consumable |
| CaCl2.2H2O | Sigma | C8106 | Consumable |
| T75 Tissue Culture Flask | BD Biosciences | 137787 | Consumable |
| Chitosan | Sigma-Aldrich | 448869 | Consumable |
| Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 320099 | Consumable |
| N-Octanol | Acros Organics | 150630025 | Consumable |
| Sorbitan-Mono-Oleate | Sigma-Aldrich | S6760 | Consumable |
| Potassium Hydroxide | Sigma-Aldrich | P1767 | Consumable |
| Acetone | Fisher Scientific | L-4859 | Consumable |
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 270741 | Consumable |
| Trinitro Benzenesulfonic Acid | Sigma-Aldrich | P2297 | Consumable |
| Hydrochloric Acid | Sigma-Aldrich | 320331 | Consumable |
| Ethyl Ether | Sigma-Aldrich | 472-484 | Consumable |
| 8-μm Tissue Culture Plate Inserts | BD Biosciences | 353097 | Consumable |
| 1.5-ml Microcentrifuge Tubes | Fisher | 05-408-129 | Consumable |
| MTT Reagent | Invitrogen | M6494 | Consumable |
| Dimethyl Sulfoxide | Sigma-Aldrich | D8779 | Consumable |
| Qtracker Cell Labeling Kit(Q Tracker 655) | Molecular probes | Q2502PMP | Consumable |
| Type 1 Collagen | Travigen | 3447-020-01 | Consumable |
| Sodium Hydroxide | Sigma-Aldrich | S8045 | Consumable |
| 12-Well Tissue Culture Plates | BD Biosciences | 353043 | Consumable |
| Fibrinogen | Sigma | F3879 | Consumable |
| Thrombin | Sigma | T6884 | Consumable |
| Benztriazole Derivative of Polyethylene | Sunbio | DE-034GS | Consumable |
| Tris Buffer Tablet (pH 7.6) | Sigma | T5030 | Consumable |
| Centrifuge | Eppendorf | 5417R | Equipment |
| Orbital Shaker | New Brunswick Scienctific | C24 | Equipment |
| Humidified Incubator with Air-5% CO2 | Thermo Scientific | Model 370 | Equipment |
| Overhead Stirrer | IKA | Visc6000 | Equipment |
| Magnetic Stirrer | Corning | PC-210 | Equipment |
| Vacuum Desiccator | – | – | Equipment |
| Particle Size Analyzer | Malvern | STP2000 Spraytec | Equipment |
| Water Bath | Fisher Scientific | Isotemp210 | Equipment |
| Spectrophotometer | Beckman | Beckman Coulter DU 800UV/Visible Spectrophotometer | Equipment |
| Vortex | Diagger | 3030a | Equipment |
| Microplate Reader | Molecular Devices | SpectraMax M2 | Equipment |
| Light/Fluorescence Microscope | Olympus | IX71 | Equipment |
| Confocal Microscope | Olympus | FV-500 Laser Scanning Confocal Microscope | Equipment |
| Scanning Electron Microscope | Carl Zeiss MicroImaging | Leo 435 VP | Equipment |
| Transmission Electron Microscope | JEOL | JEOL 1230 | Equipment |
Referências
- Natesan, S. A bilayer construct controls adipose-derived stem cell differentiation into endothelial cells and pericytes without growth factor stimulation. Tissue Eng. Part A. 17, 941-953 (2011).
- Nuttelman, C. R., Tripodi, M. C., Anseth, K. S. Synthetic hydrogel niches that promote hMSC viability. Matrix Biol. 24, 208-218 (2005).
- Benoit, D. S. Integrin-linked kinase production prevents anoikis in human mesenchymal stem cells. J Biomed Mater Res A. 81, 259-268 (2007).
- Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert, S. E. Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues and cell delivery. , (2008).
- Natesan, S. Adipose-derived stem cell delivery into collagen gels using chitosan microspheres. Tissue Eng. Part A. 16, 1369-1384 (2010).
- Bubnis, W. A., Ofner, M. C. The determination of epsilon-amino groups in soluble and poorly soluble proteinaceous materials by a spectrophotometric method using trinitrobenzenesulfonic acid. Anal. Biochem. 207, 129-133 (1992).
- Zhang, G. A PEGylated fibrin patch for mesenchymal stem cell delivery. Tissue Eng. 12, 9-19 (2006).
- Bornstein, M. B. Reconstituted rattail collagen used as substrate for tissue cultures on coverslips in Maximow slides and roller tubes. Lab Invest. 7, 134-137 (1958).
- Zhang, G. Vascular differentiation of bone marrow stem cells is directed by a tunable three-dimensional matrix. Acta Biomater. 6, 3395-3403 (2010).
- Rochon, M. H. Normal human epithelial cells regulate the size and morphology of tissue-engineered capillaries. Tissue Eng. Part A. 16, 1457-1468 (2010).
- Liu, H., Collins, S. F., Suggs, L. J. Three-dimensional culture for expansion and differentiation of mouse embryonic stem cells. Biomaterials. 27, 6004-6014 (2006).
