利用颅窗口，在可视化的大脑中动脉内皮素-1诱导大脑中动脉闭塞
Summary
本文介绍了一种方法，可视化的大鼠大脑中动脉通过颅窗颞部颅骨切除术，以大脑中动脉近端部分（<strong>图1</strong>）。这种多用途的方法可以结合与药物输送的各种技术来测量脑动脉反应性<em在体内</em>。
Abstract
颅窗口的创建是一个方法，可以直接可视化结构的大脑皮质表面1-3。这种技术可以覆盖的大鼠大脑在许多地方进行，但最容易地进行通过创建一个去骨瓣在容易获得额叶或顶叶骨头。最经常的是，我们已经使用了这种技术，组合与内皮素-1的大脑中动脉闭塞模型的缺血性中风的大脑中动脉的血管直径的变化所发生的脑实质与内皮素-1注入到相邻的近端MCA量化4，5。为了形象化在内皮素-1诱导的缺血的MCA的近端部分中，我们使用一种技术，以通过颞骨大鼠颅骨外侧面（ 图1）上建立一个颅窗。脑动脉可与硬脑膜完整或与硬脑膜切开retra的的可视化反恐执行局。最常见的是，我们离开硬脑膜完整过程的可视化，因为内皮素1诱导脑缺血涉及到脑实质内的血管收缩肽交付。这将绕过切开硬脑膜直接在可视化血管药物输送的需要。该协议将介绍如何创建一个颅窗的可视化脑动脉一个逐步的时尚，以及如何避免许多关于这种方法的潜在缺陷。
Protocol
机构动物管理和使用委员会（IACUC）在佛罗里达大学和批准该协议是符合“指南的照顾和使用的实验动物”（第八版，美国国家科学院，2011年）。 物料动物：8周龄，雄性，只SD大鼠（查尔斯河农场，威尔明顿，MA，USA），体重250〜300克，手术时间。 麻醉吸入麻醉系统（VetEquip公司，普莱森顿，CA，USA） 异氟醚麻醉剂（巴克斯特制药，?…
Representative Results
静止图像捕获的视频显示取自脑动脉直径的变化后ET-1注射可以容易地理解，使用此颅窗技术（ 图2）。 ET-1注射在几分钟之内，该船将开始收缩。最终，船只将是很难想象的脑组织会变得苍白。大约20分钟后，ET-1的影响将减少，血管开始扩张，逐渐恢复到基线直径约45分钟后。除了发生比较明显的血管收缩，ET-1后管理，皮质表面变得苍白。如果需要的话，它可以在容器直径计算的绝对…
Discussion
总之，这种颅窗制备技术是非常通用的，因为它可以被改变，以满足许多实验与细微的修改4，5。例如，我们已经成功地监测脑血流量在特定的MCA分支，使用激光多普勒血流仪集中在一个的颅骨窗口（麦加AP 2009和2011年）通过观察大脑中动脉。此外，与硬脑膜阴刻类似的制剂可以使用血管活性化合物的局部给药，以创建一个在体内血管反应槽3。有几个因素应予以考虑。制备?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是支持由美国心脏协会大中华区东南亚联盟（09GRNT2060421），美国医学协会，并从大学的佛罗里达州的临床与转化科学研究所的资助。亚当麦加是一个NIH / NINDS，NRSA博士前研究员（F30 NS-060335）。高血压（T32 HL-083810）从佛罗里达州的多学科培训计划的大学，博士前奖学金罗伯特·Regenhardt收到支持。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Inhalation anesthesia system | VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA | 901806 | |
| Isoflurane anesthetic | Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA | 1001936060 | |
| Small animal stereotaxic system | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | 900 | |
| Non-rupture ear bars, rat | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | 957 | |
| Rat gas anesthesia head holder | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | 1929 | |
| BAT-12 microprobe thermometer | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | BAT-12 | |
| T/PUMP, Thermal blanket | Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA | T/PUMP, TP600 | |
| Metzenbaum Scissors | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 501254 | |
| Iris forceps | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 15915 | |
| Bulldog clamp retractors | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14119-G | |
| 10 μl syringe 26-gaugue | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | SGE010RNS | |
| Bovie, high temperature cautery kit | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 500392 | |
| Rat tooth forceps 0.12 | Stotz | E1811 | |
| Micromotor drill | Stoelting, Wood Dale, IL, USA | 51449 | |
| 0.8 mm round drill bur | Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA | RS-6280C-1 | |
| STORZ Bonn suturing forceps | Bausch and Lomb, Inc., Rochester, NY, USA | ||
| Nylon Suture, size 3.0 | Oasis, Mettawa, IL, USA | MV-663 | |
| Cotton swabs | Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA | 22-029-488 | |
| Puralube eye ointment | Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA | NC0138063 | |
| Electric hair clippers | Oster, Providence, RI, USA | 78005-301 | |
| ET-1 diluted to 80 μM concentration in PBS | American Peptide, Sunnyvale, CA, USA | 88-1-10A | |
| Chlorhexidine, 2% | Agrilabs, St. Joseph, MO, USA | 1040, Rev. 6-06, NAC No.: 10580322 | |
| Surgical microscope | Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, USA | Evolution xR6 | |
| Sony Handycam | Sony, Minato, Tokyo, Japan | HDR-SR12 | |
| Fiber optic illuminator | TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA | FO1–150 | |
| VLC media Player | (Paris, France) | ||
| Image J software | U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA |
Referências
- Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments. Stroke. 6, 308-317 (1975).
- Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats. Circ. Res. 62, 56-64 (1988).
- Regrigny, O., et al. Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo. Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).
- Mecca, A. P., O’Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion. Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).
- Mecca, A. P., et al. Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke. Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).
Citar este artigo
Regenhardt, R. W., Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K. J., Mecca, A. P. Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion. J. Vis. Exp. (72), e50015, doi:10.3791/50015 (2013).